重庆市自然科学基金(2004BB5045)
- 作品数：2 被引量：11H指数：2
- 相关作者：钱桂生周世文张克斌何晓梅黄春基更多>>
- 相关机构：第三军医大学新桥医院第三军医大学更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 铜绿假单胞菌LexA蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：2
- 2006年
- 目的克隆铜绿假单胞菌PAO1株的LexA蛋白编码区,在大肠杆菌中表达并纯化表达蛋白。方法提取铜绿假单胞菌PAO1株基因组DNA,PCR扩增LexA蛋白编码区,A-T克隆于质粒pMD 18-T载体中,阳性重组子经酶切后,回收目的片段连接至相应线性化的表达型载体pET-28a(+)中,重组质粒经测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21感受态,筛选高效表达株,表达产物经SDS-PAGE初步鉴定后,用镍珠吸附一步法纯化,表达蛋白转印PVDF膜后,经N-端测序证实。结果本研究成功克隆到PAO1株的LexA蛋白编码区并在大肠杆菌中获得表达,纯化表达蛋白经N-端测序证实确为PAO1的LexA蛋白。结论研究结果为铜绿假单胞菌PAO1株基因组中SOS盒的实验鉴定及LexA蛋白调控基因的筛选奠定了基础。
- 张克斌周世文光丽霞何晓梅钱桂生
- 关键词：铜绿假单胞菌基因克隆蛋白表达蛋白纯化
- 铜绿假单胞菌弹性蛋白酶的高效表达被引量：9
- 2005年
- 目的 提取具有弹性蛋白酶活性的铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)临床分离株的染色体DNA ,PCR扩增弹性蛋白酶基因成熟蛋白编码区,A -T克隆于质粒pMD 18-T载体中,阳性重组子经酶切后连接至相应线性化的表达型载体pQE - 31中,转化大肠杆菌JM 10 9感受态,筛选高效表达株,表达产物经SDS -PAGE初步鉴定。所克隆的基因在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物经重组质粒测序初步确定为铜绿假单胞菌弹性蛋白酶。本研究为该表达蛋白的纯化、复性和酶动力学研究奠定了基础。
- 黄春基周世文钱桂生何晓梅张克斌
- 关键词：铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因克隆基因表达
