国家自然科学基金(30671832)
- 作品数：23 被引量：86H指数：5
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- 家蝇抗菌肽及其基因的克隆进展被引量：4
- 2007年
- 家蝇抗菌肽是一类由结构基因编码的小分子肽类物质,是构成其自身防御体系的重要组分,具有广谱的抗菌、抗病毒、抑肿瘤细胞等生物活性,已引起人们的广泛关注。文中主要介绍家蝇抗菌肽的产生、结构特点、生物学功能及其基因的克隆进展。
- 刘雷山金小宝朱家勇
- 关键词：家蝇抗菌肽基因克隆
- 家蝇抗菌肽基因的表达模式研究被引量：5
- 2009年
- 本研究曾报道过家蝇生长过程中的3个基因attacin,defensin,cecropin的转录体.通过运用实时定量PCR定量分析家蝇不同发育阶段和诱导后不同时间点的三龄幼虫mRNA水平,结果显示3个基因在三龄幼虫和成虫期转录水平较高.同时分析发现,在诱导后mRNA水平显著增加,3个抗菌肽基因在敏感菌诱导后转录水平相对诱导前分别有cecropin805倍、attacin1009倍、defensin2500倍的增强.结果提示,家蝇抗菌肽基因的转录在不同发育阶段和诱导后的不同时期是有差异的.
- 王艳金小宝朱家勇曾爱华褚夫江杨小蓉马艳
- 关键词：家蝇ATTACINDEFENSINCECROPIN
- 多聚组氨酸标签的Attacin抗菌肽基因克隆及其在CHO细胞中稳定表达被引量：4
- 2007年
- 目的克隆家蝇幼虫抗菌肽Attacin-His_6融合基因,构建真核表达载体并转染CHO细胞表达,为深入研究其生物学活性创造条件。方法以pUCm-T/Attacin载体为模板,用含6×His标签序列的下游引物克隆Attacin-His_6融合基因,并将其构建于pcDNA3.1(+)中,pcDNA3.1/Attacin-His_6重组质粒转染CHO细胞,ZeocinG418筛选阳性细胞株,RT-PCR检测重组质粒在CHO细胞的转录情况。结果成功扩增出Attacin-His_6融合基因,构建了pcDNA3.1/Attacin-His_6重组质粒并转染入CHO细胞中,RT-PCR从阳性克隆的CHO细胞中扩增出预期大小的目的片段,从转录水平证实CHO-Attacin-His_6重组细胞株表达了Attacin-His_6基因。结论抗菌肽Attacin基因哺乳动物型工程细胞表达系统的建立,为进一步制备其肽类抗生素奠定了基础。
- 徐建华朱家勇金小宝许琴英张秀明庄俊华马艳王艳
- 关键词：抗菌肽中国仓鼠卵巢细胞ATTACIN
- 新型融合多肽HTPP-MDC体外抑制HBV复制活性及亚细胞定位被引量：4
- 2013年
- 目的:研究肝细胞靶向穿膜肽-家蝇天蚕素(HTPP-MDC)融合多肽体外对乙型肝炎病毒(HBV)的抑制作用及其在肝细胞中的定位。方法:不同浓度HTPP-MDC分别与HepG2.2.15细胞和Chang liver细胞共培养,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测药物对细胞的毒性作用,应用ELISA和实时荧光定量PCR技术定量研究HTPP-MDC对HepG2.2.15细胞系分泌HBsAg、HBeAg及HBV DNA复制的影响。应用激光共聚焦技术研究HTPP-MDC在肝细胞中的定位。结果:HTPP-MDC在体外能有效抑制HepG2.2.15细胞系分泌HBsAg和HBeAg,对HBVDNA的复制亦有显著抑制作用。激光共聚焦显微镜观察显示HTPP-MDC进入细胞内部。结论:HTPP-MDC在体外对HBV复制有较强的抑制作用,并能快速透过细胞膜进入细胞内,有望用于临床治疗慢性乙型肝炎相关疾病。
- 卢雪梅黄演婷汪洁金小宝朱家勇
- 抗菌肽抗肿瘤作用免疫机制的研究进展被引量：2
- 2009年
- 梅寒芳金小宝朱家勇
- 关键词：抗菌肽肿瘤免疫调节
- 筛选家蝇抗菌肽相关基因的oligo探针设计
- 2008年
- 目的设计筛选家蝇抗菌肽相关基因的寡核苷酸(oligonucleotide)探针。方法用生物学软件ArrayDesig-ner2.0,结合NCBI开发的免费生物信息学软件,对GenBank数据库中部分昆虫抗菌肽基因编码区保守序列设计特异性高、Tm值接近、长度均一的oligo探针。结果共设计出372条oligo探针,长度为50bp,GC含量为40%～60%,Tm为70～75℃。结论用GenBank数据库资源,结合生物学软件Array Designer2.0及NCBI中相关生物信息学软件能快速而有效地设计出筛选家蝇抗菌肽基因的探针。
- 刘雷山朱家勇金小宝李源湘龚建武
- 关键词：寡核苷酸探针生物信息学
- 家蝇天蚕素-人溶菌酶融合蛋白的生物信息学分析被引量：2
- 2012年
- 目的利用生物信息学方法分析家蝇天蚕素-人溶菌酶融合基因推导的氨基酸序列。方法用ProtParam Tool、CDD、ProtScal、sopma等软件对其理化性质、疏水性/亲水性、信号肽、功能结构域及蛋白质二级结构等重要参数进行预测。结果家蝇天蚕素-人溶菌酶由187个氨基酸组成,预测相对分子质量为20 131.7,理论等电点(pI)为9.69,分子式为C862H1375N277O260S11;半衰期预测结果显示其利于基因工程表达。融合蛋白的氨基酸序列含有天蚕素家族和溶菌酶家族二者的保守结构域,二级结构主要由α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲组成。结论分析结果为家蝇天蚕素-人溶菌酶融合基因的原核表达及表达产物的生物学功能研究奠定了基础。
- 卢雪梅金小宝朱家勇黄演婷
- 关键词：人溶菌酶融合蛋白生物信息学分析
- 家蝇抗菌肽基因在家蝇幼虫中的空间转录模式被引量：1
- 2010年
- 目的研究家蝇抗菌肽基因attacin、cecropin、defensin在家蝇幼虫体内的空间转录情况。方法采用体外转录方法合成地高辛标记的cRNA探针,通过原位杂交方法检测微生物诱导前后家蝇幼虫体内attacin、cecropin、defensin变化情况。结果在未诱导的家蝇幼虫体内,体壁、中肠组织均没有检测到attacin、cecropin和defensin转录,在脂肪体中仅检测到cecropin和defensin的弱转录信号;在诱导后的家蝇幼虫中,体壁上检测到attacin和defensin强转录信号,cecropin没有转录,脂肪体中检测到attacin、cecropin和defensin强转录信号,而在中肠组织中检测到cecropin和defensin转录,没有attacin转录。结论经微生物诱导后,家蝇幼虫体内抗菌肽基因转录水平大大提高,为进一步研究家蝇抗菌肽在机体免疫中的作用及其机制打下了基础。
- 马艳朱家勇金小宝卢雪梅李小波褚夫江
- 关键词：家蝇抗菌肽原位杂交机体免疫
- 基因芯片技术筛选家蝇抗菌肽相关基因被引量：2
- 2008年
- 用生物学软件对GenBank中部分昆虫抗菌肽基因编码区保守域设计探针,用直接点样法将探针点印在特制玻片上构建寡核苷酸(Oligonucleotide,oligo)探针微阵列;提取诱导后24h的家蝇三龄幼虫脂肪体总RNA,逆转录成cDNA并标记上荧光标记物Cy3,与构建的oligo探针微阵列杂交,经洗片、扫描处理后进行数据分析。结果在两次重复实验中均检测到有效杂交信号的基因点有15个(不包括阳性对照基因),为进一步发现其新基因提供了依据。
- 刘雷山金小宝朱家勇肖平李沅湘龚建武
- 关键词：基因芯片家蝇抗菌肽基因
- 肝靶向穿膜肽与家蝇天蚕素基因的融合及其分子特征分析被引量：2
- 2012年
- 本研究利用改进SOE-PCR技术构建肝靶向穿膜肽(HTPP)与家蝇天蚕素(MDC)融合基因并对其分子特征进行了预测和分析。结果表明:成功融合了HTPP与MDC,并构建了HTPP-MDC融合基因的克隆重组质粒HTPP-MDC/pMD20-T。PCR和KpnⅠ/HindⅢ双酶切结果显示获得与预期大小一致的基因片段,测序结果显示获得的基因序列没有发生突变,与预期完全一致。分子特征分析表明,该融合基因编码60个氨基酸,分子量为6516.2Da,理论等电点为9.31,二级结构主要由α-螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-转角组成。研究结果为HTPP-MDC后续的功能研究奠定了基础,同时也为应用SOE-PCR技术构建融合基因提供了有益借鉴。
- 卢雪梅黄演婷金小宝汪洁朱家勇
- 关键词：SOE-PCR分子特征
