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国家高技术研究发展计划(2013AA102504-03): 作品数：16 被引量：28H指数：3; 相关作者：高学军骆超超黄鑫李庆章李姗姗更多>>; 相关机构：东北农业大学哈尔滨师范大学河北北方学院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程轻工技术与工程更多>>

甘氨酰tRNA合成酶对奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响被引量：2: 2016年; 甘氨酰tRNA合成酶(glycyl-tRNA synthetase,GlyRS)是重要的氨基酰tRNA合成酶(aminoacyl-tRNA synthetases,aaRSs)家族成员。目前,国内外关于GlyRS在奶牛乳腺发育过程中表达及调节的研究鲜有报道。为了揭示GlyRS的表达与奶牛乳腺发育与泌乳之间的关系,本试验应用EdU免疫荧光法、流式细胞术检测GlyRS对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMEC)中DNA数目及细胞周期的影响,实时荧光定量PCR、Western blotting技术检测GlyRS对BMEC中Cyclin D1的表达影响。结果显示,GlyRS过表达时,细胞的DNA合成、处于S期和G2/M期的细胞数、细胞中Cyclin D1的表达均增加;GlyRS抑制后,细胞的DNA合成、处于S期和G2/M期的细胞数、细胞中Cyclin D1的表达均减少。表明GlyRS通过上调Cyclin D1的表达,加快细胞周期转换,增加DNA合成数目,从而促进BMEC增殖。; 古新宇骆超超敖金霞黄鑫臧艳丽孙霞高学军; 关键词：奶牛乳腺上皮细胞细胞增殖

14-3-3γ蛋白协同mTOR信号通路影响奶牛乳腺上皮细胞生理功能被引量：1: 2015年; 14-3-3γ作为蛋白质与蛋白质之间的"桥梁蛋白",广泛参与细胞凋亡、细胞分裂、信号转导和蛋白质合成等生物体所有的重要生命活动的调节。以体外培养的荷斯坦奶牛(Vaccas)乳腺上皮细胞(dairy cow mammary gland epithelial cells,DCMECs)为模型,研究14-3-3γ对奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白、乳脂合成的影响。瞬时和稳定转染p GCMV/IRES/EGFP/14-3-3γ即14-3-3γ过表达的奶牛乳腺上皮细胞,应用CASY细胞活力分析仪分析细胞活力的变化,测定细胞中甘油三脂(triglyceride,TG)和β-酪蛋白(β-Casein,CSN2)的合成,并且通过Western blot检测DCMECs中m TOR(mammalian target of rapamycin,m TOR)和p-m TOR的表达量,探究14-3-3γ影响奶牛乳腺上皮细胞生理功能的机制。结果显示,瞬时和稳定转染p GCMV/IRES/EGFP/14-3-3γ的奶牛乳腺上皮细胞相对正常培养的奶牛乳腺上皮细胞,细胞活力极显著增强(P<0.01),CSN2和TG表达量极显著增加(P<0.01),同时m TOR和p-m TOR的表达量也显著增加(P<0.01)。研究结果表明14-3-3γ参与泌乳关键信号通路即m TOR信号通路,能够增强乳腺上皮细胞活力,促进奶牛乳腺上皮细胞CSN2和TG的合成,丰富了奶牛泌乳信号通路,为乳品质研究提供了新的理论依据。; 刘静骆超超黄建国吴迪高学军刘玉芬; 关键词：奶牛乳腺上皮细胞 MTOR 信号通路

高赖氨酸蛋白基因Cflr在枯草芽孢杆菌中表达被引量：2: 2013年; 赖氨酸作为家畜限制性必需氨基酸,其饲料含量直接影响到家畜蛋白质合成。试验利用基因工程方法,从辣椒花药中克隆出高Lys蛋白基因(Cflr),与载体pHT43构建成重组表达质粒,将其转入枯草芽孢杆菌中,IPTG诱导表达,基因在mRNA水平有表达,SDS-PAGE中出现一条明显的蛋白条带,大小为24 ku;经HPLC检测赖氨酸含量,重组菌赖氨酸含量比野生型菌株提高16.05%。该重组菌为以后其作为饲料添加剂进一步应用提供技术基础。; 武彩霞高学军李庆章骆超超毕微微史琳琳张莉; 关键词：枯草芽孢杆菌

牛NF-κB1基因的原核表达与蛋白纯化被引量：1: 2016年; NF-κB1是一类重要核转录因子,参与多种基因表达调控。NF-κB1能与奶牛乳腺中乳合成调控相关基因结合,发挥泌乳调节作用。研究应用PCR方法扩增奶牛NF-κB1基因编码序列,通过Eco RⅠ和XhoⅠ酶切位点将其定向插入p GEX-4T-1载体中,构建原核表达重组质粒p GEX-4T-1-NF-κB1,转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)。经酶切和测序鉴定正确后,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)大量诱导表达,8 mol·L^(-1)尿素裂解包涵体,裂解后上清经GST-Sepharose 4B亲和纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定。结果表明,原核表达载体p GEX-4T-1-NF-κB1构建成功,SDS-PAGE证实NF-κB1融合蛋白存在于包涵体内,纯化后得到GST-NF-κB1融合蛋白,为进一步研究NF-κB1蛋白在奶牛泌乳中作用提供试验依据。; 高学军李姗姗于萌萌李冬; 关键词：奶牛克隆原核表达纯化

肠膜明串珠菌发酵饲料的制备工艺及其在泌乳奶牛中的应用被引量：2: 2014年; 选用不同比例混合的豆粕、玉米粉、菜粕、棉粕作为原料,采用高产赖氨酸和蛋氨酸的肠膜明串珠菌菌株进行发酵研究,通过正交实验,初步确定肠膜明串珠菌发酵奶牛饲料的工艺:27℃,p H值6.7,接种量5%,培养时间为32 h,在此条件下固态、液态饲料中总蛋白、赖氨酸和蛋氨酸质量分数最高,奶牛适口性最佳,具有一定的营养保健和增乳作用。; 孙喆刘营于微张双高学军; 关键词：肠膜明串珠菌赖氨酸蛋氨酸增乳

奶牛泌乳关键基因与乳品质关系被引量：2: 2013年; 近年来奶牛泌乳基因组学研究快速发展,在奶牛营养基因组学领域取得很多研究成果。已确定STAT5、mTOR、SREBP等乳蛋白和乳脂肪合成正向调控关键基因及SOCS3、GSK3Beta等负向调控基因,但其作用机制尚待进一步研究,更多的泌乳关键基因尚待挖掘以阐明乳品质的形成机理。; 于翠平高学军骆超超张娜李庆章; 关键词：奶牛泌乳关键基因乳蛋白乳脂肪

Tudor--SN调节奶牛乳腺上皮细胞增殖与乳蛋白合成的分子机理研究: 乳汁这种原本为哺乳动物哺育后代的营养品，已经成为现代人类生活中的必不可少的重要食品。乳品中含有大量的优质蛋白质、脂类、必需维生素以及矿物质。乳被誉为“最接近完美的食品”。乳腺上皮细胞是泌乳的最基本的结构和功能单位，通过开...; 张森; 关键词：奶牛乳腺上皮细胞细胞增殖; 文献传递

脂肪酸结合蛋白5对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成的影响被引量：2: 2017年; 脂肪酸结合蛋白5(fatty acid binding protein 5,FABP5)是一种胞内脂质运载体。本试验应用甘油三酯测定法及BODIPY染色法检测奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cell,BMEC)中甘油三酯及脂滴分泌情况,采用实时荧光定量PCR、Western blotting技术检测BMECs中FABP5对固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)的表达影响。结果显示,试验成功获得高纯度的BMECs,构建了pGCMV-IRES-EGFP-FABP5真核表达载体,且与空白对照组和空载体组相比,FABP5过表达组的甘油三酯和脂滴分泌量极显著增加(P<0.01),同时SREBP-1c及靶基因FAS、ACC的表达量均极显著增加(P<0.01);试验成功筛选了FABP5siRNA1为最佳干扰片段,当FABP5抑制时,抑制组的甘油三酯、脂滴分泌量极显著减少(P<0.01),SREBP-1c、FAS、ACC的表达量均极显著降低(P<0.01)。表明FABP5可通过上调SREBP-1c的表达从而促进BMEC中乳脂的合成。; 于萌萌李萌李姗姗李冬高学军; 关键词：奶牛乳腺上皮细胞固醇调节元件结合蛋白-1C 乳脂

牛mettl3基因的原核表达与蛋白纯化被引量：2: 2017年; m^6A甲基转移酶(methyltransferase-like protein 3,METTL3)可调控m RNA的m6A甲基化水平,调节细胞蛋白质合成,实验室前期发现METTL3为乳腺上皮细胞乳合成重要调节分子,发挥泌乳调节作用。目前尚不清楚METTL3分子结构基础及其参与的调节机制。为揭示METTL3结构与功能关系,对METTL3蛋白作原核表达及纯化。研究采用PCR方法扩增牛mettl3基因完整CDS区,将CDS区插入原核表达载体p GEX-4T-1,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导METTL3蛋白大量表达,用8 mol·L-1尿素裂解包涵体,利用GST蛋白纯化试剂盒纯化诱导获得METTL3蛋白。SDS-PAGE证实GST-METTL3融合蛋白存在于包涵体内,试验获得高纯度GST-METTL3融合蛋白,为进一步研究METTL3蛋白在奶牛泌乳中作用提供重要依据。; 高学军刘丽杰李冬李姗姗陈东莹于萌萌; 关键词：原核表达纯化

脂肪酸结合蛋白3在乳脂合成信号转导通路中的研究进展被引量：3: 2013年; 脂肪酸结合蛋白3(fatty acid binding protein 3,FABP3)是脂肪酸结合蛋白家族成员之一,广泛存在于心肌、骨骼肌和泌乳期乳腺等对脂肪酸有高度需求的组织中。它参与胞内脂肪酸的短暂存储和运输,使脂肪酸进入线粒体能量代谢体系,氧化分解并产生ATP,为组织提供能量。它与脂肪酸结合形成胞内外浓度差,促进细胞摄取脂肪酸。作者主要介绍了FABP3基因及蛋白质结构、生物学功能和临床应用,并对其在乳脂合成信号转导通路中的研究进展进行了综述。; 梁梦瑶高学军李庆章侯晓明; 关键词：生物学功能乳脂信号转导通路

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