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中俄政府间科技合作项目(200913-1)
作品数:
2
被引量:12
H指数:2
相关作者:
尤列·皮尔曼
维克多·科罗索夫
周向东
罗琳
涂静
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相关机构:
俄罗斯医学科学院
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周向东
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维克多·科罗...
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尤列·皮尔曼
1篇
涂静
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罗琳
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2篇
中华医学杂志
年份
2篇
2011
共
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渗透压反应增强子结合蛋白对高渗下人气道上皮细胞黏液分泌的影响
被引量:2
2011年
目的探讨高渗刺激下渗透压反应增强子结合蛋白(OREBP)对热休克蛋白(HSP)70的转录调控及对黏液分泌的影响。方法采用体外培养的人气道上皮细胞HBE16为实验对象,分时程施加高渗条件,Western印迹检测OREBP和HSP70—2蛋白水平,ELISA检测培养上清黏蛋白(MUC)5AC分泌;进一步构建系列截短和定点突变的HSP70-2启动子荧光素酶报告基因质粒,将其与OREBP的小片段干扰RNA(siRNA)共转染HBE16细胞,求证渗透压反应增强子(ORE)在HSP70-2基因启动子上游的结合位点及对MUC5AC分泌的影响。结果600mOsm/L高渗盐水培养HBE16细胞3h后,OREBP、HSP70-2和培养上清MUC5AC蛋白相对含量分别为(0.54±0.07,0.20±0.08,0.17±0.04),与对照组(0.21±0.05,0.15±0.06,0.13±0.04)相比显著增加到2.57、1.33和1.31倍(均P〈0.05),且随高渗培养时间延长而增加,6h时分别增加到2.81、3.07、3.77倍(均P〈0.01),9h时分别增加到3.57、5.13、4.00倍(均P〈0.01),12h时分别增加到4.24、5.33、4.54倍(均P〈0.01);siRNA抑制OREBP表达48h后,高渗刺激下的OREBP、HSP704和上清MUC5AC蛋白相对含量为(0.36±0.08,0.33±0.08,0.24±0.05),和对照组(0.95±0.27,0.75±0.22,0.58±0.22)相比显著减少(蛋白抑制率分别为62%、56%和59%)(P〈0.05,P〈0.01,P〈0.05);荧光素酶测定表明HSP70—2启动子上游-353至-66区域存在一个关键的ORE位点;定点突变失活-93区域的ORE位点可引起高渗诱导条件下HSP70-2启动子的活性显著降低(P〈0.01)。结论高渗盐水诱导OREBP通过与HSP704启动子上-93位ORE结合而激活HSP70—2转录并促进HBE16细胞MUC5AC高分泌。
涂静
尤列·皮尔曼
维克多·科罗索夫
周向东
关键词:
渗透压
载体蛋白质类
黏蛋白类
阿奇霉素通过基质金属蛋白酶9抑制气道黏液高分泌的实验研究.
被引量:10
2011年
目的探讨阿奇霉素(AZT)通过基质金属蛋白酶9(MMP9)抑制气道黏液高分泌的作用机制。方法培养人支气管上皮细胞株HBE16细胞,以中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)为刺激物。AZT和表皮生长因子受体(EGFR)拮抗剂BIBX1522为干扰因素,分别对NE刺激的HBE16细胞进行预处理。培养细胞分为对照组、NE组、AZT+NE组和BIBX1522+NE组。用RT-PCR检测各组细胞黏蛋白(MUC)5ACmRNA和MMP9mRNA;ELISA检测培养上清液中MUC5AC蛋白含量;明胶酶谱法测定培养细胞内MMP9活性;Western印迹检测细胞中MMP9、前酶原MMP9(pro—MMP9)和金属蛋白酶类组织抑制剂(TIMP-1)蛋白含量及磷酸化的EGFR(p-EGFR)和磷酸化的信号末端调节激酶(P-ERK)。结果与对照组相比,NE组中MUCSAC与MMP9的基因转录(0.83±0.17,0.79±0.16)和蛋白表达水平(0.84±0.15,0.88±0.16)明显高(均P〈0.01),并且MMP9的活性指标高(392.33±18.33,P〈0.01),而pro—MMP9蛋白含量低(0.17±0.10,P〈0.01),TIMP-1含量未见明显改变,P—EGFR(0.86±0.23)和P—ERK(0.85±0.22)蛋白水平明显高(均P〈0.01);与NE组相比,AZT+NE组MUC5AC与MMP9的基因转录(0.36±0.15,0.41±0.09)和蛋白表达水平(0.30±0.08,0.37±0.14)明显低(均P〈0.01),MMP9活性也较低(295.33±14.54,P〈0.01),pro—MMP9(0.46±0.14)和TIMP-1(0.67±0.17)蛋白含量高(均P〈0.05),p-EGFR的蛋白水平未见明显改变,而p-ERK蛋白水平低(0.40±0.19,P〈0.01);与NE组相比,BIBX1522+NE组中除MIJC5ACmRNA(0.37±0.14)、MMP9mRNA(0.37±0.13)、p-EGFR(0.36±0.13)和p-ERK(0.37±0.18)明显低外(均P〈0.01),其余指标无明显改变,差异无统计学意义。结论AZT能抑制气道上皮HBE16细胞内MMP9的活性及其产生,由此发挥抑制气道黏液高分泌的�
罗琳
尤列·皮尔曼
维克多·科罗索夫
周向东
关键词:
黏蛋白类
阿奇霉素
基质金属蛋白酶9
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