“重大新药创制”科技重大专项(2012ZX09103301-044)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 相关作者：王升启王学军胡伟张秀娟李英更多>>
- 相关机构：军事医学科学院天津中医药大学河南中医药大学更多>>
- 发文基金：“重大新药创制”科技重大专项国家科技重大专项国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 新型小发卡RNA慢病毒表达载体的构建及抗乙型肝炎病毒应用评价
- 2015年
- 目的:设计用于表达新型小发卡RNA(sh RNA)的慢病毒载体,并考察其用于抗乙型肝炎病毒(HBV)的可行性。方法:对慢病毒载体骨架SapⅠ位点进行突变,并将用于表达新型sh RNA的结构亚克隆到改造后的慢病毒载体;设计靶向HBV保守序列的sh RNA并克隆到该慢病毒载体,包装含有sh RNA序列的重组慢病毒并定量,考察单个及多个sh RNA结构串联对慢病毒滴度的影响;将重组慢病毒感染HBV稳定转染肝细胞系Hep G2.CW(MOI=3),用杀稻瘟菌素筛选稳定克隆1周后,将其重新消化,并以1×105/孔接种于24孔板,于铺板96 h后取细胞上清检测HBs Ag、HBe Ag表达水平和HBV DNA的含量。结果:构建了一种用于表达新型sh RNA的慢病毒载体,并通过设计靶向HBV保守序列的sh RNA实现了HBV复制的高效抑制;发现多个sh RNA串联效果优于单个sh RNA。结论:构建的新型sh RNA慢病毒表达载体可作为防治慢性病毒感染如HBV感染的潜在有效手段之一,值得进一步研究。
- 张婷玉张秀娟毛莹莹胡伟王学军王升启
- 关键词：慢病毒载体乙型肝炎病毒
- 基于miRNA-155结构的人工miRNA表达载体的构建与评价被引量：3
- 2012年
- 目的:建立一种适用于人工miRNA(amiRNA)表达研究的克隆载体。方法:基于实验室构建的短发夹RNA(shRNA)表达载体pshOK-basic,将鼠源miRNA-155的侧翼序列插入合适的酶切位点构建得到amiRNA重组表达载体pOK-basic;应用本载体分别构建靶向萤火虫荧光素酶(luc2)和红色荧光蛋白(mCherry)基因的amiRNA并检测其沉默效果。结果:应用此载体能快速高效地构建amiRNA,靶向luc2和mCherry报告基因的amiRNA能较好地抑制靶基因的表达。结论:构建了一种能高效表达amiRNA的克隆载体,为amiRNA的进一步研究及应用奠定了基础。
- 李英谢佩雯黄海张秀娟胡伟王学军王升启
- 关键词：RNA干扰
- 人工microRNA技术研究进展被引量：2
- 2012年
- RNA干扰(RNAi)是由双链RNA触发的在mRNA水平进行的特异靶序列的基因沉默现象,广泛存在于动物、植物和病毒中,主要包括小干扰RNA(siRNA)及微小RNA(miRNA)两种作用途径。人工miRNA(amiRNA)是将天然miRNA的成熟序列替换成人工设计的靶向其他感兴趣基因的反义序列,通过天然miRNA的生成和作用途径达到RNAi的效果,具有干扰效果明显、作用迅速、毒性低等优点,拥有广阔的应用前景。我们对基于amiRNA的基因沉默技术进行了较为系统的介绍和总结,梳理了该技术的优缺点和适用范围,并展望了其进一步发展的方向和应用前景。
- 李英胡伟崔修亮王学军王升启
- 关键词：RNA干扰基因治疗
- 靶向c-Raf-1基因的反义核酸抗乙型肝炎病毒活性研究
- 2013年
- 目的:通过体内外实验验证靶向c-Raf-1基因的反义核酸是否具有抑制乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法:设计靶向c-Raf-1基因的反义核酸,并在细胞水平进行体外抗HBV活性筛选,通过RT-PCR检测c-Raf-1基因mRNA水平的变化,通过体内药效学实验进一步验证反义核酸的抗HBV效果。结果:经体外筛选,靶向c-Raf-1基因的反义核酸Raf-3145具有相对明显的抑制HBV表面抗原(HBsAg)的作用,并可剂量依赖性地抑制c-Raf-1基因的表达;体内药效学结果显示,反义核酸Raf-3145在30 mg/kg剂量下对HBsAg的表达具有一定的抑制作用。结论:经体内外活性评价,初步确定了靶向宿主基因c-Raf-1的反义核酸具有一定的抑制HBsAg表达的活性,也进一步验证了c-Raf-1基因可以作为抗HBV药物设计的候选靶点。
- 黄海张秀娟谢佩雯王学军王升启
- 关键词：乙型肝炎病毒反义核酸
