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转座酶对piggyBac转座子在弓形虫内转座活性的影响被引量：1: 2013年; 为研究转座酶(PBase)对转座子piggyBac在弓形虫细胞内转座效率的影响,将转座酶质粒Toxo-PBase和带红色荧光蛋白(RFP)的转座子质粒PB-Toxo-RFP共同电转染刚地弓形虫RH株速殖子,流式细胞仪检测转染后的弓形虫红色荧光蛋白的转座效率。结果显示,PB-Toxo-RFP和Toxo-PBase共转染组转座效率为73%,PB-Toxo-RFP转染组转座效率为43%,前组显著高于后组(P<0.01),表明转座酶能够提高piggyBac转座子在弓形虫细胞内的转座效率。; 宋鑫帅魏峰张莹光曹莉莉刘全; 关键词：PIGGYBAC转座子转座酶刚地弓形虫

弓形虫SAG1基因在蜥蜴利什曼原虫中的表达被引量：4: 2012年; 利用PCR扩增技术从弓形虫RH株全基因组中扩增出弓形虫抗原基因SAG1,将其克隆入真核表达载体质粒pLEXSY-neo2,构建真核表达穿梭质粒pLEXSY-neo2-SAG1。利用电穿孔转染技术将外源基因表达盒转入蜥蜴利什曼原虫,经G418筛选阳性克隆。表达的外源重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,证明SAG1重组蛋白在蜥蜴利什曼原虫中得到表达。; 许越杨欢欢魏峰商立民刘全; 关键词：弓形虫 SAG1基因电穿孔转染

弓形虫棒状体蛋白ROP18的原核表达及其免疫保护性研究被引量：6: 2013年; 目的克隆弓形虫ROP18基因并构建该基因的原核表达系统。方法根据GenBank发表的弓形虫ROP18序列设计合成1对特异性引物,PCR扩增ROP18抗原基因,并亚克隆到pET-28a原核表达载体,重组质粒转入大肠埃希菌BL21感受态细胞,用IPTG诱导表达,重组蛋白用SDS-PAGE及Western blot鉴定。重组蛋白经纯化后免疫小鼠,ELISA法检测血清抗弓形虫IgG,并通过攻虫试验观察重组蛋白的免疫保护作用。结果成功构建了ROP18基因原核表达质粒pET-28a-ROP18,表达重组蛋白的分子质量单位约为55ku,该蛋白可被鼠抗弓形虫多抗血清识别;经ELISA检测,重组蛋白免疫小鼠产生了较高水平的血清抗体;攻虫试验中,重组蛋白免疫小鼠生存时间较对照组小鼠显著延长(P<0.05)。结论成功构建了ROP18基因原核表达质粒,表达的重组蛋白具有一定的免疫保护作用。; 许越张莹光徐丹曹利利王巍魏峰刘全; 关键词：弓形虫原核表达

地高辛标记核酸探针检测重组人白细胞介素1受体颉颃剂中DNA残余量的研究: 2013年; 试验旨在建立重组人白细胞介素1受体颉颃剂(interleukin-1receptor antagonist,IL-1ra)原液中宿主菌DNA残余量的检测方法。以重组白细胞介素1受体颉颃剂工程菌基因组DNA为模板,优化试验条件,借助超声波手段,制备地高辛标记的核酸探针,并以此探针进行狭缝杂交及显色反应。结果显示,在24批次重组人IL-1ra原液中,每人份使用剂量的宿主DNA残余量均小于10ng。结果表明,该方法灵敏度较高、特异性较强、重复性较好、操作步骤安全且较为方便,可用于重组人IL-1ra原液及半成品的DNA残余检测。; 王超刘庚张林波; 关键词：地高辛

弓形虫致密颗粒蛋白GRA1原核表达及应用: 引言弓形虫病(Toxoplasmosis)是由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)引起的一种重要人兽共患寄生虫病,可导致人及动物流产、畸形或死胎,严重危害公共卫生安全和畜牧业生产。弓形虫已知有15种不同的速殖...; 蔡玉峰王雅丽王泽东王巍刘全魏峰

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