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教育部科学技术研究重点项目(02180): 作品数：9 被引量：79H指数：6; 相关作者：牛建新马兵钢朱军王小兵覃伟铭更多>>; 相关机构：石河子大学新疆生产建设兵团绿洲生态农业重点实验室浙江大学更多>>; 发文基金：教育部科学技术研究重点项目国家自然科学基金国家科技攻关计划引导项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

库尔勒香梨上ACLSV的RT—PCR检测被引量：18: 2003年; 以库尔勒香梨叶片和皮层为材料通过改进提取方法提取总RNA,获得了较完整的RNA,在此基础上进行了反转录和PCR扩增。并进行了库尔勒香梨上ACLSV(Apple chlorotic leaf sopt virus)的RT-PCR检测,建立了该病毒的RT-PCR检测体系。用此体系扩增得到了ACLSV一个长约为358bp的片段。; 牛建新刘连科朱军覃伟铭吴忠华王小兵; 关键词：库尔勒香梨 RT-PCR

梨组织中苹果褪绿叶斑病毒的原位RT-PCR检测被引量：12: 2007年; 为了建立梨树苹果褪绿叶斑病毒原位RT-PCR检测技术，用已知带有苹果褪绿叶斑病毒的库尔勒香梨和无病毒实生苗叶片为材料，利用DIG标记，研究了香梨病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。包括AMV逆转录酶、dNTPs、RNasin及互补引物浓度对cDNA合成的影响，退火温度、TaqDNA聚合酶、Mg^2＋、引物浓度及循环次数对原位PCR效果的影响。结果表明：RNasin的用量大于0．2U·μL^-1时，信号强度随着RNasin量的加大而增强；只有当dNTPs浓度达1．0mmol·L^-1时才能生成一定量的cDNA；AMV浓度在0．3-0．5U·μL^-1均可进行正常的逆转录，而且在该范围内产物的量随AMV浓度提高而增多；引物浓度达到0．9μmol·L^-1以上时才能进行有效的逆转录，并且生成的cDNA的量随引物浓度增大而增加。原位扩增ACLSV的cDNA适合退火温度为56℃。循环20-30次可出现较强的蓝色信号，引物浓度在0．8-1．2μmol·L^-1时显色较好；Taq酶浓度为20U·μL^-1以上，均显示较深的蓝色；Mg^2＋浓度为1．5mmol·L^-1就可满足原位PCR所需。获得了苹果褪绿叶斑病毒的原位PCR优化检测体系，利用建立的优化程序对香梨样品进行了检测验证，取得了很好效果。; 牛建新周民生马兵钢赵英刘宏; 关键词：库尔勒香梨苹果褪绿叶斑病毒原位PCR

Subcellular Distribution of Cadmium in Mining Ecotype Sedum alfredii被引量：19: 2003年; The mining ecotype Sedum alfredii Hance could tolerate and grow normally in a nutritive solution containing cadmium (Cd) as high as 400 mumol/L. Under such a high Cd concentration, the subcellular accumulation of Cd in root, stem and leaf of this plant was found to be the highest in the cell wall, less in the soluble fraction and lowest in the cell organs. The mode of subcellular distribution of Cd in the mining ecotype S. alfredii was similar to other hyper accumulators of heavy metals, in which Cd was distributed more in the aerial part of plant. The results suggest that the mining ecotype S. alfredii is a new species of Cd hyperaccumulator.; 倪天华魏幼璋

库尔勒香梨的苹果褪绿叶斑病毒cDNA探针检测技术研究被引量：2: 2005年; 以库尔勒香梨叶片和皮层为材料,对两种植物总RNA提取方法进行了比较研究,从中筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法;并利用RT-PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针,在此基础上,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了实验研究。结果表明,当探针浓度为400ng/mL,甲酰胺浓度为45%,42℃杂交反应6h,可获得最高灵敏度。Tween20的封闭效果比牛血清白蛋白好。对不同组织和不同提取方法提取的总RNA进行了杂交检测,并对库尔勒地区香梨带毒情况进行了检测。结果表明,不论幼叶、老叶、皮层及冷冻叶片均可出现杂交信号,两种提取方法提取的总RNA也都出现了杂交信号,库尔勒香梨样品有45%的带苹果褪绿叶斑病毒。; 牛建新朱军马兵钢; 关键词：苹果褪绿叶斑病毒 CDNA探针库尔勒香梨 RNA提取方法 PCR反应体系杂交检测

梨树ASPV检测试剂盒研制及其应用被引量：1: 2005年; 以库尔勒香梨为材料,利用SDS法提取总RNA,通过苹果茎痘病毒(apple stem pitting virus,ASPV)的基因组序列设计特异性寡核苷酸引物,利用RT-PCR技术研制梨树ASPV的RT-PCR检测试剂盒。该试剂盒的检出其痕量为2.88pg,整个检测过程只需6-8h。该试剂盒在常温下能保存1周以上,在4℃条件下可保存1年以上。试剂盒扩增ASGV病毒,不能得到特异性带。与用NASH方法检测病毒比较,结果表明,该ASPV试剂盒具有特异、灵敏等优点。; 何梅牛建新马兵刚; 关键词：RT-PCR 试剂盒

利用RT-PCR检测库尔勒香梨苹果茎痘病毒的研究被引量：7: 2003年; 以库尔勒香梨新鲜、冷藏、冷冻叶片和皮层为材料 ,对提取双链RNA (dsRNA)的 2种方法和提取总RNA的 3种方法进行了分析比较 ,并对总RNA的提取方法进行了改进 ,获得了纯度较高、完整性较好的dsRNA和总RNA ,在此基础上进行了反转录 (RT)和PCR扩增。在国内首次完成了对苹果茎痘病毒 (ASPV)的RT PCR检测 ,建立了ASPV有效RT PCR反应体系。用此体系扩增到ASPV一个长约 316bp的片段。实验表明以dsRNA和总RNA为模板均能成功进行RT PCR检测 ,且dsRNA优于总RNA。; 刘连科牛建新王小兵覃伟铭; 关键词：库尔勒香梨苹果反转录 PCR扩增

库尔勒香梨病毒病多重RT-PCR检测技术研究被引量：5: 2004年; 在建立PVYV和ACLSVRT PCR优化体系的基础上,主要研究了多重PCR中2套引物的浓度和退火温度的影响,研究表明:多重PCR体系中引物Tm值越高、长度越长浓度就需越高;如果Tm值相差不大,退火温度的确定要以Tm值高的引物为准。应用该体系可以节约成本、缩短时间。; 牛建新刘连科马兵钢朱军李海生何梅; 关键词：多重RT-PCR

库尔勒香梨主要病毒多重RT-PCR检测技术研究被引量：25: 2006年; 利用nad5基因作为内标系统,研究建立了库尔勒香梨上苹果茎痘病毒(ASPV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)和苹果茎沟病毒(ASGV)等的RT-PCR检测技术,在此基础上研究建立了库尔勒香梨多重RT-PCR内标检测系统。并对回收的特异片段进行了克隆、鉴定和测序。测序结果表明:库尔勒香梨上的ACLSV与GenBank中D14996序列(日本苹果上的 ACLSV分离物)中的6860-7536 bp片段有116个碱基的差异,序列相似性为83．75％;库尔勒香梨上的ASPV与GenBank 中D21828序列(德国梨脉黄病毒相关分离物)中的8869-9238 bp片段有72个碱基的差异,序列相似性为79．5％;库尔勒香梨上的ASGV与GenBank中AB004063序列(日本ASGV分离物)中的6039-6311 bp片段有21个碱基的差异,序列相似性为92．3％。; 牛建新马兵钢何梅李海生赵英李西平周多进; 关键词：病毒内标多重RT-PCR

梨树病毒cDNA探针检测技术研究: 合成了生物素标记的cDNA探针,优化了检测体系,并对香梨样品进行检测,斑点清晰,是首次应用生物素标记的cDNA探针对ACLSV进行检测。; 牛建新朱军马兵钢李海生何梅; 关键词：库尔勒香梨苹果褪绿叶斑病毒 CDNA探针; 文献传递

库尔勒香梨的苹果茎痘病毒cDNA探针检测技术研究被引量：7: 2004年; 以库尔勒香梨叶片和皮层为材料 ,对 2种总RNA提取方法进行了比较研究 ,从中行筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法 ;并利用RT PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针 ,在此基础上 ,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了试验研究 ,结果表明 ,当探针浓度为 4 0 0ng·ml-1,甲酰胺浓度为 4 5 % ,4 2℃杂交反应 6h ,可获得最高灵敏度。进口硝酸纤维素膜的灵敏度最好 ,基本无背景。Tween2 0的封闭效果比牛血清白蛋白好。对不同组织和不同提取方法提取的总RNA进行了杂交检测 ,结果表明 ,不论幼叶、老叶、皮层及冷冻叶片均可出现杂交信号。; 牛建新朱军马兵钢覃伟铭王小兵吴忠华; 关键词：库尔勒香梨苹果茎痘病毒 CDNA探针

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