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DNA甲基化对Ki-67启动子转录活性的影响被引量：6: 2011年; 目的观察DNA甲基化对Ki-67启动子转录活性的影响。方法使用S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体，使用甲基化酶（M．SssI、M．HpalI、M．HhaI）诱导Ki-67启动子DNA片段发生不同程度的甲基化，将甲基化的启动子片段插入pGL3-Basic载体得到甲基化Ki-67启动子荧光素酶报告质粒，并以非甲基化Ki-67启动子荧光素酶报告质粒作为对照，分别转染正常细胞（HL-7702、HUVEC）和肿瘤细胞（A549、EJ、Kert-3、Hela和SGC-7901），使用双荧光素酶报告基因检测系统测定甲基化的Ki-67启动子在这些细胞中的转录活性。结果甲基化Ki-67启动子的转录活性均有不同程度的下降，其下降幅度依次为M．SssI处理组〉M．HhaI处理组〉M．HpalI处理组，其中M．SssI处理组启动子的转录活性几乎完全消失。结论Ki-67启动子的甲基化抑制了其转录活性，抑制程度与DNA甲基化程度和甲基化位置有关。; 李望钱国伟徐为田卉李连涛刘俊杰陈菲菲李慧中章龙珍郑骏年; 关键词：DNA甲基化 KI-67基因启动子转录活性

细胞核增殖抗原启动子调控荷载双基因RNA干扰的条件增殖腺病毒的构建被引量：2: 2012年; 目的构建细胞核增殖抗原（Ki-67）启动子调控表达Ki．67基因和人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因小干扰RNA（siRNA）的条件增殖腺病毒。方法（1）合成hTERT—siRNA插入pSilenc—er3．1，构建pShTERTsiRNA质粒。（2）分别酶切Ki-67启动子质粒pZKi-67、Ki-67．siRNA质粒pZD55-Ki-67-siRNA，获得Ki-67启动子片段和Ki-67．siRNA片段并连接，构建质粒pZKi-67-ZD-Ki-67-siRNA。（3）以pShTERT—siRNA为模板，PCR获得hTERT—siRNA及H1启动子片段，克隆进pZKi-67-ZD—Ki-67-siRNA，构建质粒pZKi-67-ZD—Ki-67-siRNA．hTERT．siRNA。（4）将其与腺病毒骨架质粒pBHGE3共转染293细胞，9～12d后出现病毒空斑。提取重组腺病毒DNA，行聚合酶链反应（PCR）鉴定。结果病毒ZKi-67-ZD—Ki-67-siRNA—hTERT—siRNA构建成功，其包含Ki-67启动子、Ki-67-siRNA、hTERT—siRNA片段。结论成功构建Ki-67启动子调控荷载Ki-67、hTERT双基因RNA干扰的条件增殖腺病毒，为研究靶向肿瘤治疗奠定基础。; 陈仁富程伟松程乾李连涛方琳刘俊杰温儒民李望郑骏年; 关键词：人端粒酶逆转录酶基因 RNA干扰

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江苏省自然科学基金(BK2009091)