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国家自然科学基金(30271170): 作品数：28 被引量：95H指数：6; 相关作者：杨东亮卢银平陆蒙吉刘朝董继华更多>>; 相关机构：华中科技大学埃森大学武汉市疾病预防控制中心更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>

慢性丙型肝炎患者α干扰素和α干扰素受体1的检测被引量：1: 2006年; 目的建立检测外周血单个核细胞α干扰素受体1(IFNAR1)及检测诱导表达α干扰素(IFN-α)的方法,评价慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)细胞免疫功能与α干扰素治疗的关系。方法Poly IC体外刺激正常对照组和慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染组患者PBMC,利用病毒保护试验研究干扰素治疗前后患者PBMC表达的干扰素抗病毒生物学活性差异;IFN-α治疗前后,RT-PCR检测慢性丙型肝炎患者不同干扰素应答组患者PBMC IFNAR1表达的变化。结果对照组PBMC分泌的干扰素活性显著高于慢性丙型肝炎患者应答组患者(P<0.001);干扰素应答组患者PBMC分泌的干扰素活性随治疗时间延长而增加,治疗1个月后显著高于无应答组患者PBMC分泌的干扰素活性(P<0.01),后者始终处于低下水平;IFN-α治疗期间干扰素应答组患者PBMC IFNAR1水平从治疗前的高表达而逐渐减少,正常对照和干扰素无应答组患者PBMC IFNAR1的表达始终较低。结论慢性HCV感染患者的细胞免疫功能受损,不能正常表达IFN-α,但应答组患者经干扰素治疗后IFN-α表达能力逐渐恢复;干扰素无应答组患者PBMC IFNAR1表达受到严重抑制;慢性丙型肝炎患者PBMCIFN-α活性检测及IFNAR1检测结果也许可以作为干扰素治疗预后的判断指标。; 卢银平董继华刘朝管世鹤杨东亮; 关键词：慢性丙型肝炎外周血单个核细胞 Α干扰素

土拨鼠白细胞介素15的克隆、表达和活性分析: 2006年; 目的对土拨鼠白细胞介素15(woodchuck interleukin 15,wIL-15)分子进行克隆、表达并鉴定其活性,为进一步研究IL-15在嗜肝病毒感染中的作用以及评价IL-15用于治疗慢性HBV感染奠定基础。方法用IL-15的保守引物将wIL-15基因克隆、测序并进行分析,构建wIL-15的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达,分离纯化后用淋巴细胞增殖试验检测其生物学活性。结果wIL-15的完整编码序列为489 nt(与其他哺乳动物IL-15编码序列的同源性高达78％-87％),编码162 AA长度的前体蛋白(与其他哺乳动物IL-15蛋白的同源性高达70％-80％),其信号肽为N端的48 AA,成熟蛋白由114 AA组成。土拨鼠IL-15与灵长动物IL-15的同源性高于啮齿动物。带有His-tag的成熟蛋白,可以在大肠杆菌中表达,分离纯化后,可以刺激Con A活化的小鼠脾细胞和土拨鼠PBMC增殖(其SI值可高达10以上),并存在明显的剂量依赖性。结论(1)wIL-15与其他哺乳动物IL-15高度同源,并且与灵长类动物的IL-15更接近。(2)wIL-15可以在大肠杆菌中表达,并在纯化后能刺激小鼠和土拨鼠淋巴细胞增殖,表现出较好的生物学活性。; 王宝菊Beate Lohrengel卢银平Micheal Roggendorf陆蒙吉杨东亮; 关键词：土拨鼠白细胞介素15

中国旱獭IL-10分子的克隆和序列分析被引量：3: 2006年; 目的克隆旱獭白细胞介素-10(IL-10)全长cDNA序列进行序列分析,为IL-10分子的表达和在土拨鼠肝炎病毒(woodchuckhepatitisvirus,WHV)感染中的应用奠定基础。方法根据Genbank的土拨鼠IL-10cDNA序列,在5′非编码区和3′非编码区设计特异性引物,提取旱獭脾组织总RNA作为模板,RT-PCR扩增旱獭IL-10cDNA。PCR产物纯化后连接至T载体(pMD18-T),构建重组质粒pMD18-T-cmIL-10。对重组质粒进行酶切鉴定,选择阳性克隆测序。对所获得的序列应用分析软件进行分析。结果RT-PCR扩增产物为685bp。重组质粒pMD18-T-cmIL-10经EcoRⅠ与PstⅠ双酶切提示含目的基因片段。序列分析提示旱獭IL-10的编码序列为537bp,与土拨鼠IL-10的同源性为100%。结论成功克隆旱獭IL-10分子,并构建重组质粒pMD18-T-cmIL-10。; 李安意王宝菊田拥军江敏鲍俊杰郝友华喻植群陆蒙吉杨东亮; 关键词：白细胞介素-10

替诺福韦体外抑制乙型肝炎病毒复制的研究被引量：2: 2009年; 目的观察抗乙型肝炎病毒(HBV)核苷类似物替诺福韦体外对HBV复制的抑制作用。方法噻唑蓝(MTT)比色法检测药物对细胞的毒性作用。将乙型肝炎病毒复制子pHBV1.3质粒转染HepG2细胞,在转染细胞培养液中加入不同浓度的替诺福韦,然后在不同时间段观察替诺福韦的抗病毒作用。ELISA检测培养上清中HbsAg,HBeAg的表达,荧光定量PCR(FQ-PCR)定量检测培养上清中HBV DNA拷贝数,Southern blot分析转染细胞中HBV复制中间体。结果替诺福韦降低了培养上清中HbsAg,HBeAg水平及HBV DNA拷贝数,抑制了转染细胞中HBV复制中间体的形成。替诺福韦对HBV复制子体外复制的抑制作用依赖于药物浓度及作用时间。结论替诺福韦在体外对HBV复制有较强的抑制作用,有望用于临床治疗慢性乙型肝炎。; 卢银平郭涛董继华刘朝陆蒙吉杨东亮; 关键词：替诺福韦乙型肝炎病毒抗病毒

乙型肝炎病毒表达载体pHY106在筛选抗病毒药物中的意义被引量：1: 2007年; 目的应用新的HBV表达载体，建立体外筛选临床抗HBV药物的方法。方法克隆对拉米夫定耐药的CHB患者体内HBV全基因组，然后将其亚克隆到HBV真核表达载体pHY106，体外转染Huh7细胞，检测转染后不同时间HBsAg、HBeAg、HBVDNA及HBV复制中间体水平。分析拉米夫定和阿德福韦对HBV基因表达和复制的抑制作用，指导临床用药。结果成功构建全部8个HBV临床分离株全基因组真核表达质粒，HBV聚合酶基因YMDD有5个产生YVDD突变，3个产生YIDD突变。该质粒上HBV基因能在Huh7细胞中进行复制和表达，拉米夫定不能体外抑制HBV复制，阿德福韦抑制了HBV在Huh7细胞中的复制，抑制程度与药物浓度相关。阿德福韦在患者体内也抑制了HBV的复制。结论新建立的体外筛选抗HBV药物的方法能用于临床快速筛选抗HBV药物，对CHB的治疗用药具有指导意义。; 卢银平董继华刘朝管世鹤陆蒙吉杨东亮; 关键词：肝炎病毒乙型肝炎乙型抗病毒药

嗜肝DNA病毒感染动物模型研究进展: 目的动物模型是人们了解病毒复制、病毒感染自然史、病毒持续感染和致病的分子机制,研制有效抗病毒药物和疫苗的不可或缺的工具。嗜肝DNA病毒不仅包括HBV,也包括其它哺乳动物的嗜肝病毒,如土拨鼠肝炎病毒(WHV)、地松鼠肝炎病...; 杨东亮; 关键词：病毒复制 HBV 病毒感染 DNA; 文献传递

中国青海地区喜马拉雅旱獭嗜肝病毒自然感染的组织学研究被引量：14: 2005年; 应用原位杂交技术、免疫组化技术以土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepatitis virus,WHV)的检测系统检测50份喜马拉雅旱獭肝组织可能存在的嗜肝病毒c基因、s抗原及c抗原的表达,同时检测肝脏组织病理学改变。结果显示旱獭肝组织中嗜肝病毒s抗原、c抗原的阳性率分别为26％(13／50)、36％(18／50);在抗原双阳性的10份肝组织标本中有c基因的阳性表达,阳性率为50％。c抗原定位于肝细胞胞浆和／或胞核,呈散在、片簇状分布,c基因定位于肝细胞的细胞核,阳性细胞散在分布。50份标本中5份出现肝炎的病理改变,与抗原检出间无明显相关性。使用WHV 的病毒检测系统证实青海地区喜马拉雅旱獭可能存在类似WHV的嗜肝病毒感染,从组织学的角度为中国青海地区喜马拉雅旱獭嗜肝病毒自然感染提供证据,此种动物有可能用于建立嗜肝病毒感染的动物模型。; 李新宇王宝菊孟忠吉汪由坤赵西平陆蒙吉杨东亮; 关键词：原位杂交免疫组化

乙型肝炎病毒前C区1896 G→A点突变对母乳喂养安全性的影响被引量：2: 2008年; 目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）前C区1896 G→A点突变对母乳喂养安全性的影响。方法收集62例本院妇产科HBeAg阴性的HBV感染产妇血标本，同时收集这些孕妇产后48h内初乳。应用PCR固相杂交法检测孕妇血清中HBV DNA前C区1896 G→A突变，荧光定量PCR（FQ—PCR）检测孕妇血清和初乳中HBV DNA含量。分析HBV前C区1896 G→A点突变及孕妇血清HBV DNA含量与初乳中HBV DNA含量的对应关系。结果62例孕妇血标本共检测到38例HBV前C区1896G—A点突变（61．3％）；突变组初乳HBV DNA阳性率为28．9％（11／38），未突变组初乳HBV DNA阳性率为29．2％（7／24），两组间差异无统计学意义（x^2=0．0003，P〉0．05）。孕妇血中HBV DNA高含量组（≥1×10^5拷贝／ml）初乳HBV DNA阳性率为56．0％（14／25），低含量组（〈1×10^5拷贝／ml）初乳HBV DNA阳性率为10．8％（4／37），两组间差异有统计学意义（x^2=14．79，P〈0．01）。结论HBV前C区1896G—A点突变未对初乳HBV DNA阳性率造成影响，但孕妇血清中HBV DNA含量升高增加了母乳喂养HBV母婴传播的危险性。; 卢银平曹伟洪梅祝建芳刘朝杨东亮; 关键词：点突变母乳喂养聚合酶链反应

New therapeutic vaccination strategies for the treatment of chronic hepatitis B被引量：9: 2014年; Chronic hepatitis B virus(CHB) is currently treated with either interferon-based or nucleot(s)idebased antiviral therapies.However,treatment with pegylated interferon alpha results in a durable antiviral response in only about 30%patients and is associated with side effects.Most patients receiving nucleot(s)ide analogue treatment do not establish long-term,durable control of Infection and have rebounding viremia after cessation of therapy.Thus,novel therapy strategies are necessary to achieve the induction of potent and durable antiviral immune responses of the patients which can maintain long-term control of viral replication.Therapeutic vaccination of HBV carriers is a promising strategy for the control of hepatitis B.Here the authors review new therapeutic vaccination strategies to treat chronic hepatitis B which may be introduced for patient treatment in the future.; Jia LiuAnna KosinskaMengji LuMichael Roggendorf; 关键词：IMMUNOMODULATION

一种新的土拨鼠α干扰素基因分型方法的建立及其意义: 2007年; 目的:建立新的土拨鼠α干扰素(IFN-α)基因分型方法,分析急性和慢性土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepati-tis virus,WHV)感染的土拨鼠肝细胞中不同型别的IFN-α基因表达谱及其意义。方法:利用已知序列和基因型的土拨鼠IFN-α基因克隆质粒,建立基于土拨鼠IFN-α基因序列的限制性片段长度多态性的土拨鼠IFN-α基因分型方法。PolyIC体外刺激正常土拨鼠外周血单个核细胞(PBMC),调查正常土拨鼠PBMC受PolyIC刺激后IFN-α基因的表达谱。提取急性和慢性土拨鼠肝炎病毒感染的土拨鼠肝组织mRNA,RT-PCR扩增土拨鼠IFN-α基因,分子克隆后调查急性和慢性感染的土拨鼠肝细胞中IFN-α基因表达谱。结果:建立了土拨鼠IFN-α基因限制性片段长度多态性分型方法。急性和慢性感染的土拨鼠肝细胞中IFN-α基因的表达谱明显不同于正常动物的表达谱,假基因表达所占比例大。结论:新建立的土拨鼠IFN-α基因分型方法可用于分析土拨鼠不同组织中IFN-α的基因表达谱。; 卢银平徐飏王宝菊董继华陆蒙吉杨东亮; 关键词：土拨鼠 Α干扰素基因分型

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