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国家自然科学基金(30271179)

作品数:15 被引量:44H指数:5
相关作者:卢春曾怡唐桂霞钱超黄丽更多>>
相关机构:南京医科大学江苏省人民医院更多>>
发文基金:国家自然科学基金霍英东青年教师基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
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文献类型

  • 15篇中文期刊文章

领域

  • 13篇医药卫生
  • 4篇生物学
  • 1篇农业科学

主题

  • 11篇疱疹
  • 7篇肉瘤
  • 7篇卡波
  • 7篇卡波济肉瘤
  • 7篇卡波济肉瘤相...
  • 4篇人类疱疹病毒
  • 4篇人类疱疹病毒...
  • 4篇细胞
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  • 1篇单克隆
  • 1篇单克隆抗体
  • 1篇蛋白
  • 1篇性周期

机构

  • 14篇南京医科大学
  • 1篇江苏省人民医...

作者

  • 14篇卢春
  • 11篇曾怡
  • 7篇唐桂霞
  • 6篇钱超
  • 5篇黄丽
  • 3篇秦娣
  • 2篇姚水洪
  • 2篇汤巧
  • 2篇张玲
  • 1篇贾雪梅
  • 1篇陈秀英
  • 1篇程林
  • 1篇朱建中

传媒

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  • 3篇病毒学报
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  • 1篇临床检验杂志
  • 1篇中华传染病杂...

年份

  • 2篇2006
  • 5篇2005
  • 4篇2004
  • 4篇2003
15 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
HIV-1感染相关细胞因子IFN-γ通过Rta基因启动子激活人类疱疹病毒8型被引量:9
2004年
目的 研究HIV 1感染中相关细胞因子IFN γ对人类疱疹病毒 8型 (HHV 8)Rta基因启动子活性影响 ;评价Rta基因启动子在多种细胞中的启动活性。方法 将已构建的HHV 8Rta启动子 +虫荧光素酶报告基因重组质粒和含HIV 1Tat基因重组表达质粒转染多种细胞 ,转染后 2 4h加入IFN γ和 或重组HIV 1gp12 0刺激 ,刺激后 2 4h收集细胞 ,进行虫荧光素酶活性检测。试验同时以佛波酯类化合物TPA刺激为阳性对照 ,进行最佳刺激时间点的选择和不同转染方法转染效率的比较。结果 ①HHV 8Rta启动子启动活性在TPA刺激后的 2 4h达到最高峰 ;②HHV 8Rta启动子启动活性的发挥不依赖于HHV 8和 或EBV基因组的存在 ,且在血管内皮细胞 (HUVECs)中启动活性最佳 ;③IFN γ可以诱导Rta启动子活性 ;但HIV 1Tat和gp12 0蛋白与IFN γ协同上调Rta启动子活性的能力较弱。结论 HIV 1感染中相关细胞因子IFN γ至少部分通过Rta基因启动子激活HHV
卢春曾怡黄丽钱超唐桂霞
关键词:IFN-Γ基因启动子人类疱疹病毒8型基因重组质粒
卡波济肉瘤相关疱疹病毒潜伏相关核抗原编码基因的克隆及表达被引量:1
2004年
目的:分离卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)潜伏相关核心抗原(LANA)羧基端基因(ORF73C),并在大肠杆菌中克隆和表达。方法:设计一对PCR引物,在引物的5′端分别引入BamH I和EcoR I酶切位点,提取稳定状态的BCBL-1细胞的总DNA作模板,通过PCR扩增KSHV ORF73C,PCR产物经双酶切后按正确的读码框克隆进原核表达质粒pGEX-6p-1中,并转化大肠杆菌感受态细胞BL21,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。结果:经核酸序列测定及分析,分离、克隆的ORF73C基因与基因数据库中登记的ORF73基因的羧基端的621bp的序列有99%同源性。经IPTG诱导的重组质粒转化菌体SDS-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳显示有大小约为46ku的融合蛋白表达。结论:初步表明ORF73C基因在大肠杆菌中获得正确表达。
黄丽卢春曾怡
关键词:卡波济肉瘤相关疱疹病毒原核表达
卡波济肉瘤相关疱疹病毒编码IL-6基因的分离克隆及在NIH3T3细胞中的表达研究被引量:8
2006年
目的:分离克隆卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)编码IL-6基因(vIL-6),并导入NIH3T3细胞中进行真核表达。方法:根据KSHV编码IL-6基因核苷酸序列设计一对引物,在引物的5′端分别引入BamHⅠ、HindⅢ酶切位点,以原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增vIL-6基因,PCR产物经双酶切克隆进真核载体pcDNA3.1(+)。进一步在原有的下游引物5′端加上一段flag序列,以经过序列测定正确的重组质粒为模板,PCR扩增vIL-6-flag融合基因,构建含vIL-6-flag的重组质粒。将该质粒转染NIH3T3细胞,经G418筛选获细胞抗性克隆。最后用抗flagM2单克隆抗体进行Westernblot检测vIL-6在NIH3T3细胞中的表达。结果:获得vIL-6-flag融合基因,全长671bp,其中vIL-6基因核苷酸序列与GenBank中所登记的KSHVvIL-6基因呈现100%同源性。Westernblot结果显示,在约25ku位置有目的条带,与预期的重组vIL-6-flag融合蛋白大小一致。结论:KSHVvIL-6编码基因在NIH3T3细胞中初步获得表达。
陈秀英卢春程林曾怡姚水洪秦娣
关键词:卡波济肉瘤相关疱疹病毒真核表达
开放读码框架50基因介导HIV-1感染相关的肝细胞生长因子诱导人类疱疹病毒8型复制被引量:3
2004年
目的 研究人类疱疹病毒 8型 (HHV 8)开放读码框架 (ORF) 5 0基因启动子在HIV 1感染相关细胞因子肝细胞生长因子 /驱散因子 (HGF/SF)诱导原发性渗出性淋巴瘤 (PEL)BC 3中潜伏感染的HHV 8复制过程中的作用。方法 将HGF/SF连续加入到体外培养的BC 3中 ,分别于培养第 3天和第 7天收集刺激细胞 ,电子显微镜观察成熟HHV 8病毒的形成 ;提取细胞总RNA ,North ernblot和定量聚合酶链反应 (PCR)法检查HHV 8次要衣壳蛋白ORF2 6mRNA转录。同时 ,将已构建的HHV 8ORF5 0启动子 +虫荧光素酶报告基因重组质粒和含HIV 1Tat基因重组表达质粒分别共转染BC 3和人脐静脉血管内皮细胞 (HUVECs) ,转染后 2 4h加入HGF/SF和 /或重组HIV 1gp12 0刺激 ,刺激后 2 4h收集细胞 ,进行虫荧光素酶活性检测。试验同时以佛波酯 (TPA)刺激为阳性对照。结果 HGF/SF可以上调HHV 8ORF2 6mRNA表达 ,且于刺激的第 7天 ,ORF2 6mRNA表达上升了 4 .1倍 ,BC 3细胞中同时可观察到成熟的HHV 8病毒粒子 ;HGF/SF能够诱导ORF5 0启动子活性 ,但HIV 1Tat和 gp12 0蛋白与HGF/SF协同上调ORF5 0启动子活性的能力较弱。 结论 HIV 1感染相关细胞因子HGF/SF诱导HHV 8复制的过程至少有部分由ORF5 0启动子介导。
卢春曾怡钱超唐桂霞
关键词:肝细胞生长因子启动区
CD/5-FC对KSHV肿瘤转化基因K12诱导NIH3T3转化细胞的杀伤作用
2005年
采用分子克隆技术构建含卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi′ssarcoma-associatedherpesvirus,KSHV)转化基因K12和含胞嘧啶脱氨酶(CD)基因重组逆转录病毒表达质粒,分别命名为LZRS-K12和pLXSN-Fcy∷Fur。将LZRS-K12质粒转染NIH3T3细胞系,诱导细胞转化获得具有肿瘤细胞生物学特性的N/K12细胞,进一步将pLXSN-Fcy∷Fur质粒转染N/K12细胞,获得含CD基因的N/K12/FF细胞。加入5-氟胞嘧啶(5-FC)后,采用MTT法、流式细胞仪和免疫组化(IHC)等方法,分别检测细胞存活率、凋亡率及凋亡相关蛋白的表达。结果显示,N/K12/FF细胞在使用5-FC后存活率明显下降。流式细胞仪检测结果显示,5-FC作用后的N/K12/FF细胞的凋亡率与作用前相比增加了4.6%。与此同时,经5-FC作用后的N/K12和N/K12/FF细胞的生长周期发生了明显变化,均表现为G0-G1期细胞比率降低,S和G2-M期细胞比率增高。5-FC使得N/K12细胞的增殖主要阻滞在G2-M期,而N/K12/FF细胞的增殖主要阻滞在S期。IHC检测结果表明,N/K12细胞在5-FC使用前后Fas和Fas-L表达改变均不明显;而N/K12/FF细胞在5-FC使用后的Fas和Fas-L表达水平均明显高于5-FC使用前的水平。提示,CD/5-FC对KSHV肿瘤转化基因K12诱导NIH3T3转化细胞具有杀伤作用;凋亡有可能介导了部分杀伤过程;Fas和Fas-L有可能部分参与凋亡的诱导。
唐桂霞卢春
关键词:卡波济肉瘤相关疱疹病毒CD/5-FC系统卡波济肉瘤杀伤作用
HIV-1相关炎性细胞因子诱导人血管内皮细胞中潜伏感染KSHV的溶解性周期复制被引量:4
2005年
目的研究HIV21感染相关炎症细胞因子是否能够激活人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)中潜伏感染的卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV);探讨该激活作用是否由KSHVRta基因所介导。方法采用体外模拟系统,研究了与HIV-1感染T细胞诱生的细胞因子相似的重组人细胞因子对HUVEC中潜伏感染的KSHV复制的影响。通过Northernblot和定量PCR检测ORF26(该基因编码的病毒次要衣壳蛋白仅在KSHV被激活时表达)mRNA表达来分析KSHV的激活。运用KSHVRta基因启动子(KSHV复制时最先被激活的启动子)驱动的虫荧光素酶报告基因进一步证实并扩展研究结果。结果包括干扰素-γ(IFN2γ)、肝细胞生长因子P扩散因子(HGFPSF)及制瘤蛋白M(oncostatinM,OSM)在内的重组细胞因子不仅可诱导HUVEC中潜伏感染的KSHV发生溶解性周期复制,而且能增强Rta启动子活性。结论HIV-1感染相关的炎性细胞因子是诱导HUVEC中KSHV溶解性周期复制的因素,而且该过程至少有部分由KSHV的Rta启动子介导。
卢春唐桂霞曾怡钱超秦娣
关键词:细胞因子卡波济肉瘤相关疱疹病毒
HHV6感染激活卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)的溶解性周期复制被引量:1
2005年
运用细胞融合、细胞混合培养、条件培养基培养和病毒直接刺激等方法,研究人类疱疹病毒6型(HHV6)对卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)溶解性周期复制的影响。①将HHV6感染的JJhan细胞(T淋巴细胞系)与BCBL-1细胞(原发性渗出性淋巴瘤,PEL)进行细胞融合形成异核体细胞。②将HHV6感染的JJhan细胞与BCBL-1细胞进行混合培养。③收集HHV6感染的JJhan细胞培养上清液作为条件培养基进行灭活处理,以灭活前后的条件培养基培养BCBL-1细胞。进一步离心纯化HHV6病毒颗粒,并感染BCBL-1细胞,分别设紫外线和热灭活的HHV6病毒颗粒感染BCBL-1细胞为对照。提取上述的实验细胞总RNA,RT-PCR和/或实时定量(Real—time)PCR检测卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)次要衣壳蛋白编码基因ORF26mRNA转录。结果显示:①细胞融合后15h开始出现明显细胞病变,RT-PCR检测不同时间的实验组ORF26mRNA转录水平均明显高于对照组;Real—timePCR检测各时间ORF26mRNA转录水平是对照组的2.3倍以上;②细胞混合培养72h时,实验组ORF26mRNA转录水平是对照组的1.8倍;混合培养5天时,实验组KSHV裂解周期蛋白K8.1表达水平是对照组的2.46倍;③灭活前后的HHV6感染细胞培养上清液培养BCBL-1细胞96h时,ORF26mRNA转录水平分别是对照组的2.73倍和2.22倍;④灭活前后的HHV6均可增强BCBL-1细胞中KSHVORF26mRNA转录水平。提示:HHV6感染可激活KSHV的溶解性周期复制。
曾怡卢春
关键词:卡波济肉瘤MRNA转录ORF2性周期
卡波济肉瘤相关疱疹病毒K12基因诱导裸鼠体内肿瘤的形成被引量:6
2005年
目的证实卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)K12基因在体外可以转化小鼠成纤维细胞系NIH3T3细胞,体内可以诱导肿瘤的形成。方法采用PCR法构建含KSHVK12基因的重组反转录病毒表达质粒,将该质粒转染NIH3T3细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞。采用软琼脂集落形成试验和裸鼠成瘤试验,分别证实K12基因体外转化细胞和体内致瘤特性。免疫组化(IHC)染色进一步评价转化细胞及其诱导的肿瘤组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、Fas和FasL的表达水平。结果K12基因转化的NIH3T3细胞在软琼脂中可以形成集落、在裸鼠体内可以形成肿瘤;转化的细胞及其诱导的肿瘤组织中可观察到VEGF、Fas和FasL的表达,其中,Fas和FasL的表达较高。结论KSHVK12基因具有体外转化细胞、体内诱导肿瘤形成的能力。
唐桂霞卢春曾怡
关键词:卡波济肉瘤相关疱疹病毒裸鼠基因诱导转化细胞KSHV反转录病毒
卡波济肉瘤相关疱疹病毒包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体的鉴定被引量:1
2006年
目的:对已制备并经初筛的卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体进行特异性鉴定。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA),经3次克隆选择,筛选出能稳定分泌针对K8.1蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株共9株。采用Westernblot法评价9株杂交瘤细胞培养上清识别原核表达重组K8.1蛋白和原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1中KSHVK8.1包膜糖蛋白的能力。结果:筛选了9株能够稳定分泌抗K8.1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;Westernblot法显示,9株单抗均能特异性识别原核表达K8.1/GST融合蛋白和BCBL-1中KSHVK8.1包膜糖蛋白。结论:成功制备了KSHV包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体。
姚水洪卢春张玲汤巧曾怡唐桂霞秦娣钱超
关键词:卡波济肉瘤相关疱疹病毒单克隆抗体酶联免疫吸附试验WESTERNBLOT
Reactivation of Latent Infection of Human Herpesvirus 8 in BC-3 Cells from Primary Effusion Lymphoma by Recombinant CytokinesSimilar to that Produced by HIV-1-infected T Cells被引量:5
2003年
Objective: To study and confirm that recombinant cytokines similar to those produced by HIV-1 infected T cells induced lytic cycle replication of human herpesvirus 8 (HHV-8) in BC-3 cells, another cell line from primary effusion lymphama(PEL). Methods: The persistent stimulation of BC-3 was conducted by several cytokines known to be produced by HIV-1-infected T cells and important in growth and proliferation of Kaposi's sarcoma(KS)cells in vitro, such as the interferon-γ (IFN-γ) , tlie hepatocyte growth factor/scatter factor (HGF / SF) , the Oncostain M(OSM) , and the tumor necrosis factor-α (TNF-α)which is not produced by HIV-1-infected T cells. Treated and untreated BC-3 cells were collected at the 3rd and 7th day of persistent stimulation, respectively. Immuno-histochemical (IHC) staining, Northern blot, quantitative PCR (real- time PCR ) and electron microscopy (EM) were carried out to detect the expression of immunogenic protein ORF59, messenger RNA (mRNA) of minor capsid protein ORF26, and the presence of viral particles of HHV-8 from treated and untreated BC-3 cells. Results: It showed that IFN-γ, HGF/SF, OSM, and TNF-α were found to induce an increase in mRNA expression of ORF26 when added individually to BC-3 cells. Particularly, ORF26 expression stimulated with IFN-γ and TNF-α respectively, increased 6. 1 and 2. 5-fold(from real-time PCR results)at the 7th day when compared with untreated BC-3 cells. Meanwhile, about 20% of IFN-γ stimulated BC-3 cells expressed ORF59 at the 7th day as compared with 1. 5% of untreated BC-3 cells when IHC staining was employed. In addition, viral particles of HHV-8 were readily identified in BC-3 cells stimulated with IFN-γ at the 7th day with EM analysis. Conclusion;TNF-α and recombinant cytokines being similar to those produced by HIV- 1 infected T Cells could really induce HHV- 8 lytic cycle replication in BC-3 cells, another cell line of PEL.
卢春曾怡黄丽
关键词:CYTOKINES
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