国家自然科学基金(31201369)
- 作品数：10 被引量：32H指数：3
- 相关作者：王丽桑宏庆叶华王丹丹刘媛更多>>
- 相关机构：安徽科技学院江苏省农业科学院南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省农业科技自主创新基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：理学生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 基于核酸适配体的荧光法检测水胺硫磷和丙溴磷被引量：12
- 2016年
- 建立了基于适配体的农药水胺硫磷和丙溴磷的荧光检测方法。采用可特异性识别水胺硫磷和丙溴磷、且5＇端标记荧光基团FAM的核酸适配体（F-ss DNA）,与3＇末端标记猝灭基团DABCYL的短链序列（Q-ss DNA）互补杂交形成双链结构,荧光基团的荧光被淬灭,荧光信号很弱;此时加入靶分子,特异性结合核酸适配体,引起互补短链序列从双链结构中解离,使适配体荧光信号增强,基于此可实现水胺硫磷、丙溴磷的定量检测。优化后的检测条件为：将终浓度为25 nmol/L F-ss DNA与50 nmol/L Q-ss DNA在25℃孵育20 min,使二者杂交形成双链适配体探针复合物,加入等体积的农药样品孵育60 min,然后检测体系的荧光信号变化值ΔI。在最佳条件下,ΔI与水胺硫磷和丙溴磷的浓度均在50~500μmol/L范围内呈线性关系。水胺硫磷的检出限（LOD,3σ）为11.4μmol/L,相对标准偏差（RSD）为5.8%（n=10）;丙溴磷的检出限为14.0μmol/L,RSD为4.9%（n=10）。用于实际水样中两种农药的检测,加标回收率为85.8%~95.3%，
- 王丽叶华桑宏庆王丹丹
- 关键词：核酸适配体荧光水胺硫磷丙溴磷
- 核酸适体及其在食品安全领域的应用被引量：4
- 2013年
- 核酸适体作为一种具有替代抗体潜能的新型仿生生物识别元素,是近年来研究的热点。在食品安全领域,抗生素、重金属、食源性致病菌、生物毒素等多种物质的核酸适体已被成功筛选和应用。本文介绍了核酸适体的特点和优势、识别靶分子的机制、体外筛选的流程,综述了核酸适体在食品安全领域的应用研究进展。
- 王丽桑宏庆
- 关键词：核酸适体食品安全分子识别
- 基于有机磷农药与碱基作用的核酸适体活性位点研究被引量：2
- 2014年
- 为了研究核酸适体与4种有机磷农药的作用位点,采用紫外吸收光谱法研究了甲拌磷、丙溴磷、水胺硫磷、氧化乐果与4种碱基的作用。结果表明4种有机磷农药对4种碱基的紫外吸收光谱有不同程度的影响,使碱基的吸收峰发生了红移和减色效应;其中水胺硫磷与胸腺嘧啶、胞嘧啶、腺嘌呤的作用最强,氧化乐果与鸟嘌呤、腺嘌呤、胞嘧啶的作用其次,而丙溴磷、甲拌磷与碱基之间的作用较弱。适体Loop环上的T,C碱基是水胺硫磷重要的结合位点,A,G碱基是氧化乐果重要的结合位点,G碱基是丙溴磷重要的结合位点,而Loop环上的碱基可能不是甲拌磷直接作用的位点。
- 王丽桑宏庆
- 关键词：有机磷农药碱基紫外吸收光谱法核酸适体活性位点
- 加工贮藏方式对蔬菜中有机磷农药残留量的影响被引量：2
- 2016年
- 目的:研究生菜、四季青两种蔬菜在不同的加工贮藏方式下有机磷农药的残留情况。方法:采取清洗、烹调、贮藏三种方式处理含有有机磷农药的蔬菜,通过酶抑法测定其抑制率。结果:贮藏方式对蔬菜中有机磷农药的去除无明显影响,清洗和烹调方式对农药残留的去除效果明显。在清洗方式中,去除农残效果的顺序为碱水浸泡清洗>洗涤液清洗>盐水浸泡清洗>清水清洗;在烹调方式中,去除农残效果的顺序为热水烫漂>沸水煮>炒。结论:清洗和烹调方式对蔬菜中有机磷农药残留的影响较大,贮藏方式对有机磷农药影响不大。
- 张献领王丽
- 关键词：蔬菜有机磷农药残留
- 紫外光谱法研究久效磷与碱基的相互作用
- 2014年
- 为利用组合化学原理构建核酸适体库,确定久效磷适体筛选缓冲体系的最适p H值及离子强度,采用紫外吸收光谱法研究了不同p H值及不同Na+、K+和Mg2+浓度的缓冲溶液中久效磷与四种碱基的相互作用。结果表明,p H值及Na+、K+和Mg2+浓度对久效磷与四种碱基的作用有明显的影响,p H7.6、Na+浓度200 mmol/L、K+浓度40 mmol/L、Mg2+浓度15 mmol/L的50 mmol/L Tris缓冲溶液中久效磷与四种碱基的作用相对较强,可以作为久效磷适体筛选的参考缓冲体系。在此缓冲体系下,久效磷与四种碱基作用的强弱依次为胞嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤。因此,构建核酸适体库时可以适当增加胞嘧啶、胸腺嘧啶的比例。
- 王丽刘飞桑宏庆
- 关键词：久效磷碱基紫外光谱法相互作用
- 核酸适体筛选方法的研究进展被引量：5
- 2015年
- 核酸适体是能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的寡核苷酸序列,可识别的靶分子范围非常广,理论上自然界存在的任何物质均可通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术,筛选到其相应的核酸适体。近年来,在传统SELEX技术的基础上,新的SELEX技术不断出现,如毛细管电泳SELEX(capillary electrophoresis SELEX,CE-SELEX)、荧光磁珠SELEX(Flu Mag SELEX)、自动化SELEX(automated SELEX)、细胞-SELEX(cell-SELEX)、消减SELEX(subtractive SELEX)技术等。这些新技术的出现,在不断完善SELEX技术的同时,也极大地推动了适体技术在各学科领域中的发展及应用。本文对核酸适体的筛选方法进行了总结和展望,为核酸适体的筛选提供了参考。
- 徐龙峰王丽
- 关键词：核酸适体
- 基于分子信标的有机磷农药核酸适体活性鉴定被引量：1
- 2016年
- 利用有机磷农药与分子信标竞争结合核酸适体的原理,建立了核酸适体活性的荧光鉴定方法,对前期筛选的15条核酸适体的活性进行了鉴定。结果表明,分子信标设计合理,甲醇和4种有机磷农药对分子信标发夹结构的稳定性影响较小,室温孵育时间为60 min时体系荧光强度趋于稳定,当体系中适体与分子信标的添加比例为1∶5时,荧光强度的净增量达到最大值。适体鉴定结果表明适体ss4,ss6,ss12,ss16,ss24和ss27对甲基对硫磷表现出了一定的活性,但亲和活性均较弱;适体ss5,ss12,ss13和ss24对马拉硫磷表现出了一定的活性,其中适体ss5活性最好,荧光抑制率达到了64.97%;适体ss1,ss4,ss6,ss7,ss10,ss16,ss17,ss23,ss27和ss29对辛硫磷表现出了一定的活性,其中适体ss27活性最好,荧光抑制率达到了49.42%;适体ss13,ss26和ss27对乐果表现出了一定的活性,其中ss26活性最好,荧光抑制率达到了44.35%。
- 徐龙峰王丽郭晨
- 关键词：有机磷农药核酸适体分子信标活性
- 辛硫磷试纸的制备及其在金银花检测中的应用被引量：2
- 2014年
- 利用比色法原理制备了辛硫磷检测试纸,对显色体系进行了筛选,对试纸制备的条件进行了研究,制备了标准比色卡,通过与国标法对比,对试纸进行了评价。以加厚滤纸为辛硫磷检测试纸的纸材,在体积分数0.5%的2,6-二溴苯醌氯酰亚胺溶液中浸泡5 min,干燥条件为30℃下鼓风干燥20 min。检测时在溴蒸气上的熏蒸时间为25 s,辛硫磷检测试纸检出限为5 mg/L,检测结果与国标法相吻合。
- 桑宏庆王丽汪伟
- 4种有机磷农药DNA适体的筛选及结构分析被引量：3
- 2013年
- 利用SELEX技术从一个固定的随机ssDNA库中同时筛选甲拌磷、丙溴磷、水胺硫磷、氧化乐果4种有机磷农药的DNA适体。随着筛选轮数的增加,4种有机磷农药从固定的随机库中洗脱的ssDNA逐渐富集,经过12轮的筛选,筛选效率达到40.8%。对第12轮洗脱的ssDNA进行克隆、测序,挑选的15个阳性克隆均测序成功,由于部分克隆具有完全一致的序列,最终筛选到5条ssDNA序列。一级结构序列分析表明5条ssDNA具有一定的同源性,二级结构预测表明5条ssDNA的二级结构主要以茎环结构为主,表明茎环结构可能是适体结合4种有机磷农药的基础。
- 王丽刘贤金张存政刘媛屠康
- 关键词：有机磷农药
- 基于核酸适体与分子信标的水胺硫磷和丙溴磷检测被引量：2
- 2016年
- 根据靶分子与分子信标竞争结合核酸适体的原理,建立了基于核酸适体与分子信标的水胺硫磷和丙溴磷检测方法,优化了检测条件,并对建立的检测方法进行了评价。优化的检测条件为农药与适体ssDNA-35先孵育20min,然后按分子信标与适体ssDNA-351：1的比例加入分子信标MB1,25℃条件下孵育60min。在最佳条件下,抑制率与水胺硫磷在50-250μmol/L浓度范围内呈线性关系,检出限为25.138μmol/L,RSD为2.9%;抑制率与丙溴磷在150-500μmol/L浓度范围内呈线性关系,检出限为79.963μmol/L,RSD为6.3%。用于实际水样中两种农药的检测,加标回收率为77.9%-103.3%。
- 王丽叶华王蓓蓓吴从婷
- 关键词：核酸适体分子信标水胺硫磷丙溴磷
