湖南省科技计划项目(S2010R1040)
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 相关作者：杨梦李艳周晓哲郑治黄利华更多>>
- 相关机构：中南大学湘雅三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 带Myc、His标签的SPAG4L真核表达载体的构建与表达被引量：4
- 2013年
- 为了获得带有His、Myc双标签的SPAG4L蛋白,建立能够稳定表达该蛋白的细胞系,本研究利用PCR技术从人睾丸cDNA中扩增SPAG4L开放阅读框,构建到pcDNA3.1(+)myc-his真核表达载体中进行测序和双酶切验证。将pcDNA3.1/myc-His(-)A/SPAG4L质粒和空白载体分别转染HeLa细胞,G418筛选后建立稳定转染细胞系。用Western blotting和免疫荧光技术对新建立的稳定转染细胞系进行检测。结果表明,成功扩增了SPAG4L基因,构建到pcDNA3.1/myc-His(-)A真核表达载体后,经酶切和测序验证所插入的SPAG4L序列完全正确;pcDNA3.1/myc-His(-)A/SPAG4L转染HeLa细胞后,经G418筛选后建立了稳定转染细胞系。Western blotting检测后发现,新建立的细胞系能够正确表达SPAG4L及其标签蛋白,进一步的免疫荧光实验发现,SPAG4L能够和内质网标签蛋白PDI共定位。研究结果所提供的稳定转染细胞系将为下一步进行免疫共沉淀和pull-down实验提供了有力的工具。
- 陈颜亮郑治王剑龙周晓哲李艳杨梦黄利华邢晓为
- 关键词：标签转染真核表达蛋白功能
