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广东省科技计划工业攻关项目(20098060700106)
作品数:
3
被引量:8
H指数:2
相关作者:
孙刚
杨诚
魏丽清
梁小玲
张熙芳
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周焕娇
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高糖诱导人视网膜血管内皮细胞脯氨酸羟化酶2表达变化和对内皮细胞屏障功能的影响
被引量:2
2013年
目的观察高糖诱导人视网膜血管内皮细胞(HRECs)脯氨酸羟化酶2(PHD2)的表达变化和对内皮细胞屏障功能的影响。方法将培养至融合的HRECs分为三组,分别为正常对照组、甘露醇对照组与高糖组。正常对照组细胞培养液含5mmol/L葡萄糖,甘露醇对照组细胞培养液含5mmol/L葡萄糖和25mmol/L甘露醇,高糖组细胞培养液含30mmol/L葡萄糖。培养24、48h后收集细胞蛋白、上清液及RNA。蛋白免疫印迹法检测细胞PHD2、缺氧诱导因子la(HIF-1a)及紧密连接蛋白occludin的蛋白表达水平;酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中血管内皮生长因子(VEGF)的含量;实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞PHD2、HIF-1a、VEGF及occludin基凶的转录水平;相对分子质量7×104的异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖检测细胞旁通透性。结果与正常对照组相比,甘露醇对照组与高糖组HRECs中PHD2蛋白表达水平均先降低后升高,HIF-1a表达升高,occludin表达降低;高糖组细胞上清液中VEGF含量增加,差异均有统计学意义(PHD2:F=7.618、8.627,P〈0.05;HIF-1a:X2=7.692、7.652,P〈0.05;occludin:F=23.23、7.317,P〈0.05;VEGF:F=10.768、4.562,P〈0.05)。与正常对照组相比,甘露醇对照组与高糖组HRECs的PHD2、HIF-1a、VEGF及occludin基因转录水平升高,差异均有统计学意义(PHD2:F=5.69、14.27,P〈0.05;HIFla:F=6.07、10.47,P〈0.05;VEGF:F=12.31、9.14,P〈0.05;occludin:F=8.77、8.00,P〈0.05)。与正常对照组相比,甘露醇对照组与高糖组细胞旁通透性增加,差异有统计学意义(X2=20.57、F=56.09,P〈0.05)。结论高糖诱导HRECsPHD2表达发生变化。PHD2可能在内皮细胞屏障破坏中发挥一定的调控作用,其机制与HIF-1a、VEGF有关。
梁小玲
魏丽清
周焕娇
孙刚
杨诚
张熙芳
杨璐
林佩蓉
关键词:
血管内皮生长因子类
动物实验
脯氨酰羟化酶在糖尿病大鼠视网膜的表达及其意义
被引量:1
2012年
目的观察探讨糖尿病(DM)大鼠视网膜组织中脯氨酰羟化酶(PHI)12)的表达及意义。方法雄性Wistar大鼠108只,随机分为DM模型组和正常对照组,分别为60、48只。对DM模型组大鼠进行一次性腹腔注射1%链脲霉素枸橼酸(STZ)溶液建模,正常对照组腹腔注射等量的枸橼酸缓冲液。造模后1、3、6个月,荧光显微镜下观察大鼠视网膜血管分布形态。造模后1~6个月,采用伊凡思蓝(EB)灌注视网膜铺片检测视网膜组织内EB浓度;免疫组织化学染色法观察大鼠视网膜PHD-2阳性染色的分布特点;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测大鼠视网膜中PHD-2、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果荧光显微镜观察结果显示,正常对照组大鼠视网膜血管走行规则,浅深层血管形态清晰;DM模型组大鼠视网膜血管渗漏持续存在。造模后1~6个月,DM模型组大鼠视网膜血管外组织内EB含量较正常对照组明显增加,差异有统计学意义(t=3.810,2.722,2.845,2.342,2.456,3.823;P〈0.05)。免疫组织化学染色结果显示,DM模型组及正常对照组大鼠视网膜中均可见PHD-2阳性染色,主要分布于视网膜内核层、神经节细胞层及血管壁。Westernblot检测结果显示,DM模型组大鼠视网膜中PHD-2表达在造模后1、2个月时较正常对照组下降(t=16.230,16.390;P〈0.05);HIF-1α表达在造模后1、2、3个月时较正常对照组明显升高(t=27.073,36.709,10.176;P〈0.05);VEGF表达在造模后1~6个月均较正常对照组升高(t=13.547,31.984,21.897,8.912,9.019,14.046;P〈0.05)。结论PHD-2在DM大鼠视网膜组织中有丰富表达。PHD-2可能在糖尿病视网膜病变发生发展中有一定的调控作用,其作用途径及机制与VEGF作用通路有关。
梁小玲
孙刚
陈方
周焕娇
魏丽清
杨诚
丁运刚
张熙芳
关键词:
动物实验
川芎嗪对氧诱导视网膜病变中视网膜神经细胞凋亡的抑制作用
被引量:5
2011年
目的观察川芎嗪(TMP)对氧诱导视网膜病变(OIR)中视网膜神经细胞凋亡的抑制作用。方法48只C57BL/6新生幼鼠随机分为正常对照组、0IR对照组及OIR药物组,分别为18、18、12只。正常对照组在正常空气环境中饲养。OIR对照组、OIR药物组幼鼠于出生后7d置于含氧体积分数(75±3)%的氧气箱中连续生活5d;出生后12d,幼鼠回到正常空气环境中饲养,建立OIR模型。出生后12~16d,OIR药物组按200mg/kg的剂量腹腔注射TMP,1次/d;正常对照组、0IR对照组同时注射相同体积的含0.1%二甲基亚砜(DMs0)的生理盐水。出生后12、14、17d,摘除幼鼠眼球作石蜡切片并行苏木精-伊红(HE)和脱氧核苷酸末端转移酶介导缺口末端标记(TuNEL)染色。观察视网膜无灌注区形态学变化,检测视网膜神经细胞凋亡数量。结果正常对照组幼鼠视网膜各层结构清晰。出生后12d,OIR对照组幼鼠视网膜内核层(INL)可见少量染色质凝聚的细胞核。出生后14d,OIR对照组幼鼠视网膜INI。可见大量染色质凝聚的细胞核,OIR药物组幼鼠视网膜INI。均可见少量染色质凝聚的细胞核。出生后17d,OIR对照组幼鼠视网膜INL、内丛状层(IPL)和外丛状层(OPL)厚度变薄;OIR药物组幼鼠视网膜中周部INL、IPL和OPL厚度较正常对照组薄,较0IR对照组厚。出生后12d,OIR对照组幼鼠视网膜TUNEL阳性细胞数量为正常对照组的6倍,差异有统计学意义(t=9.432,P〈0.001)。出生后14d,3组幼鼠视网膜TUNEL阳性细胞数量比较,差异有统计学意义(F=587.217,P〈0.001);OIR对照组幼鼠视网膜TUNEL阳性细胞数量为正常对照组的28倍,差异有统计学意义(t=49.813,P〈0.001);OIR药物组幼鼠视网膜TuNEL阳性细胞数量较0IR对照组减少了82.3%,差异有统计学意义(t=42.434,P〈0.001)。出生后17d,3组幼鼠视网膜TUNEL�
梁小玲
周焕娇
杨诚
孙刚
张熙芳
魏丽清
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