国家自然科学基金(30370655)
- 作品数：6 被引量：20H指数：3
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- 葡萄籽提取物对缺血再灌注导致衰老大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用被引量：3
- 2009年
- 目的探讨葡萄籽提取物(Grape seed extract proanthocyanidin,GSPE)对缺血再灌注(I/R)导致衰老大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用。方法分离培养24月龄Wistar雄性大鼠的原代肾小管上皮细胞,第3代后,将细胞分为对照组、10μmol/L Antimycin A处理组、GSPE干预组以及Antimysin A+GSPE组。Anexin V/PI染色,流式细胞仪检测肾小管上皮细胞凋亡情况,定量PCR和Western印迹法分别检测Caspase-3mRNA和蛋白表达水平,化学发光法检测细胞Capsase-3活性及过氧化物丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。激光共聚焦检测细胞内活性氧(ROS)的浓度。结果(1)衰老大鼠肾小管细胞经Antimycin A处理后,凋亡率增高,Caspase-3,MDA,ROS明显增加,SOD下降;(2)经GSPE干预后,其凋亡情况明显好转,caspase-3、MDA、ROS明显降低。SOD含量部分恢复(P<0.05)。结论老年大鼠肾小管细胞在I/R损伤时,ROS堆积,线粒体损伤导致肾小管上皮细胞凋亡。GSPE可清除ROS从而达到抑制肾小管上皮细胞凋亡、减轻I/R损伤的作用。
- 洪权肖博晗魏日胞汪杨刘晓峦冯哲陈香美
- 关键词：衰老肾小管上皮细胞凋亡
- 间隙连接蛋白43表达改变对肾小管上皮细胞转分化的影响被引量：9
- 2007年
- 目的 研究肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化（TEMT）过程中间隙连接蛋白43（connexin 43）表达和细胞间通讯功能的变化,以及上调connexin 43水平对TEMT的影响。方法 用转化生长因子（TGF）β1刺激人肾小管上皮细胞系（HKC）,检测connexin 43、上皮细胞标志物E-钙黏蛋白（E-cadherin）和肌成纤维细胞标志物α-SMA、vimentin的表达。用激光共聚焦显微镜荧光漂白恢复（FRAP）技术检测HKC细胞间通讯功能。通过pLNCX2- connexin 43病毒质粒转染HKC上调connexin 43的表达,检测以上各指标的变化,观察对TEMT的影响。结果 HKC经TGF-β1刺激后．其α-SMA和vimentin mRNA和蛋白质表达增强,而E-cadherin和connexin 43表达下降（P＜0．05）,细胞间通讯功能降低（P＜0．05）。connexin 43高表达后,TEMT程度明显减轻。结论 上调肾小管上皮细胞间通讯功能可部分减轻TEMT程度。
- 刘维萍洪权陈香美谢院生张承英李建军吴镝
- 关键词：连接蛋白43肾小管转分化细胞间通讯
- 抑制细胞间通讯功能可加速人成纤维细胞的衰老被引量：3
- 2007年
- 目的 研究间隙连接蛋白connexin43在人成纤维细胞衰老过程中的调节作用。方法 设计并合成针对人connexin43的双链RNA（siRNA），抑制人二倍体成纤维细胞WI-38细胞的connexin43表达和细胞间通讯功能，观察对其衰老相关β-半乳糖苷酶（SA—β-gad染色阳性率、细胞增殖能力、细胞周期调节蛋白P27、P21表达水平等衰老表型的影响。结果 我们合成的siRNA—cx43可高效、特异的抑制connexin43 mRNA和蛋白质表达及细胞间通讯功能。转染WI-38细胞后，细胞增殖能力降低、细胞SA—β-gal染色阳性率（75．32±5．17）较对照组（32．48±3．94）和转染siRNA—con组（37．81±4．12）细胞升高（P〈0．05），P27、P21表达增加，转染siRNA—cx43的WI-38细胞增殖能力显著降低，细胞变扁平、肥大，细胞SA—β-gal染色阳性率达100％，细胞提前出现衰老。结论 间隙连接蛋白connexin43对WI-38细胞的衰老进程有重要的调节作用，其表达减少和细胞间通讯功能降低，可以促进WI-38细胞衰老进程。
- 刘维萍陈香美孙雪峰张晓洁洪权冯哲
- 关键词：连接蛋白43细胞间通讯细胞衰老
- 叔丁基羟基茴香醚对衰老大鼠肾脏缺血/再灌注损伤的保护作用
- 2007年
- 目的观察老年大鼠肾脏缺血/再灌注(I/R)模型中肾小管上皮细胞的损伤变化,探讨ROS清除剂对I/R损伤的保护作用。方法27月龄大鼠分别随机分为假手术组、I/R模型组、活性氧清除剂——叔丁基羟基茴香醚(BHA)干预组。夹闭双侧肾动脉30min再灌注18h制成I/R模型。观察肾功能、肾脏病理改变、肾小管上皮细胞凋亡情况,检测肾组织caspase-3,测定肾组织脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果(1)肾脏I/R损伤时,老年大鼠肾功能明显减退,肾组织病理改变比较明显,大量肾小管上皮细胞凋亡,肾组织caspase-3、肾组织中MDA含量增加、SOD活性下降(P<0.05)。(2)BHA能明显的改善肾功能、组织病理改变和凋亡相关指标(P<0.05);BHA能减少组织中MDA含量,部分恢复组织中SOD含量。结论老年大鼠肾脏I/R损伤时肾小管上皮细胞凋亡增加,肾功能减退。ROS堆积后,线粒体损伤导致肾小管上皮细胞凋亡。清除ROS可以抑制肾小管上皮细胞凋亡,减轻I/R损伤。
- 梅艳丁瑞吴镝洪权师锁柱尹忠陈香美
- 关键词：衰老活性氧肾脏
- 利用PCR方法获得shRNA抑制内外源性基因的表达被引量：2
- 2005年
- 目的探讨PCR法获得的shRNA对外源性基因和内源性基因表达的抑制效果。方法选择绿色荧光蛋白(GFP)和大鼠肾脏系膜细胞高丰度表达的纤维连接蛋白(FN)分别作为外源性和内源性基因的靶基因,设计特异性引物,利用PCR扩增获得shGFPRNA和shFNRNA。前者与pEGFP质粒共转染至293T细胞,48h后进行激光共聚焦检测细胞表达GFP阳性率;后者转染至大鼠系膜细胞(RMC)中,48h后提取总RNA逆转录成cDNA,经realtimeRTPCR检测FN的mRNA表达水平,提取细胞总蛋白进行Westernblot检测FN蛋白表达水平。结果PCR获得的shGFPRNA产物能有效抑制外源性基因GFP的表达,抑制效率可达70%±3.2%;shRNA转染组内源性基因FN的表达水平明显下降,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。结论PCR方法可快速简单、廉价地获得shRNA,对内源性或外源性基因进行特异性抑制。
- 洪权吴镝陈香美冯哲孙学峰张雪光
- 关键词：纤连蛋白类
- 利用逆转录病毒RNAi载体抑制心肌成纤维细胞分泌纤维连接蛋白被引量：3
- 2004年
- 心脏间质纤维化是心室重塑的最重要表现之一, 心肌细胞外基质的过度积聚在其中扮演着重要角色. 纤维连接蛋白是细胞外基质的重要成分之一, 它负责胶原之间的连接、细胞的黏附和增殖等. 纤维连接蛋白主要由心肌成纤维细胞产生. 由于导致心肌细胞外基质过度分泌的因素很多, 单独阻断某一上游途径很难完全抑制由其他途径导致的过度合成. 利用RNAi技术试图在细胞外基质合成的终末途径进行阻断以期达到更为有效的结果. 通过体外合成的双链RNA, 抑制了纤维连接蛋白在血管紧张素Ⅱ刺激下的过度表达, 进而构建带有H1启动子的逆转录病毒载体, 成功地实现了用可稳定表达的shRNA抑制纤维连接蛋白的过度分泌. 该载体也可作为今后进行基因功能快速分析和基因治疗的工具.
- 吴镝洪权陈香美傅博李爱萍刘航王建中白雪源
- 关键词：纤维连接蛋白逆转录病毒心肌纤维化心室重塑
