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国家自然科学基金(30871884): 作品数：38 被引量：137H指数：7; 相关作者：景志忠房永祥贾怀杰陈国华何小兵更多>>; 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学中国农业科学院上海兽医研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划转基因生物新品种培育专项更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

猪繁殖与呼吸综合征病毒JX0708株的分离鉴定及其Nsp2基因的遗传变异分析被引量：3: 2010年; 采集江西省某猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征病料,RT-PCR检测可扩增出PRRSV ORF7特异性片段,序列分析发现其与美洲型毒株序列一致性达93.9%以上,与欧洲型毒株仅为69.8%。将采集的脑和肺脏处理后接种Marc-145细胞盲传,在盲传的细胞中可扩增到PRRSV ORF7特异性片段,传至第6代时出现明显的细胞病变;将该毒株NSP2非结构蛋白基因测序分析,发现其编码的氨基酸与国内近年来分离的高致病性PRRSV毒株有较高的同源性,与美洲型代表株VR-2332相比缺失第482位和533-561位共30个氨基酸;纯化病毒并进行电镜观察,可见典型的PRRSV病毒粒子。第8代的细胞毒回归30日龄仔猪,可观察到猪繁殖与呼吸综合征典型症状和病理变化。这表明已成功地分离到1株美洲型PRRSV变异株,命名为JX0708株。; 贾怀杰陈国华房永祥王晓霞李小庆莫斯科瞿惠玲景志忠; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2基因遗传变异分析

猪CD8分子α链胞外区基因片段在毕赤酵母中的表达被引量：1: 2010年; 为了给猪CD8α分子单克隆抗体的研制提供高生物学活性的抗原,采用PCR方法从pGEM-T-pCD8α重组质粒中克隆了pCD8α分子的胞外区基因片段,构建了真核融合表达载体pPIC9K-pCD8α-ED,在毕赤酵母中进行表达,并对重组基因工程菌的发酵时间、pH值进行了优化。结果表明,表达出约20ku的目的蛋白,诱导表达的最适pH值为5.0,诱导表达的最佳时间是120h。Western-blot分析结果显示,表达产物能被鼠抗人CD8α多克隆抗体识别,在20ku左右出现目的条带,说明表达的目的蛋白具有免疫活性结构。; 崔青王生富房永祥陈国华孙晓林景志忠; 关键词：真核表达毕赤酵母

机体识别病毒核酸的几种分子模式及途径被引量：13: 2011年; 近些年机体病原相关模式受体及其识别分子机制的研究,极大地促进了先天性分子免疫学的发展,并成为现代免疫学研究的重点和热点领域。作者通过机体识别病毒核酸的Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)、RIG-I样受体(RIG-I like receptors,RLRs)、NOD样受体(NOD-like receptors,NLRs)和DAI(DNA-dependent activatorof interferon-regulatory factors,DAI)等模式识别分子的细胞定位、分子结构及其识别病毒核酸途径的介绍,系统、全面地探讨了宿主机体如何全方位识别和消除入侵病毒的分子免疫防御途径,为抗病毒药物和疫苗的设计以及抗病育种提供了理论依据。; 景志忠何小兵房永祥陈国华曾爽贾怀杰; 关键词：病原相关分子模式模式识别受体病毒核酸先天性免疫

猪TLR3胞外区片段重组载体的构建、表达和多克隆抗体的制备被引量：1: 2012年; 为制备猪TLR3(poTLR3)胞外区蛋白的多克隆抗体,从poTLR3克隆载体扩增胞外区基因序列连接到pGEX-4T-1载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下,表达GST-poTLR3融合蛋白,将表达的融合蛋白纯化,免疫家兔制备抗体,并以间接ELISA法测定抗体效价,利用Western-blot和细胞免疫荧光验证抗体与真核表达蛋结合的白特异性.结果表明:制备的多克隆抗体的效价可达1∶128 000,poTLR3胞外区蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,并且制备的多克隆抗体特异性好、滴度高.; 管齐赛房永祥贾怀杰何小兵周涛杨孝朴景志忠; 关键词：胞外区原核表达多克隆抗体

DNA识别受体在天然免疫反应中的作用被引量：1: 2012年; 近年来，随着人们对哺乳动物模式识别受体（Patternrecognition receptors，PRRs）的发现和研究的不断深入，PRRs对病原，尤其是对病原生命物质基础——DNA和RNA的识别成为天然免疫学研究的热点和重点领域^[1]。PRRs主要包括Toll样受体（TLRs）家族、RIG-I样受体（RLRs）家族和蛋白激酶R（RNA-ativated protein kinase R，; 何小兵房永祥贾怀杰陈国华曾爽景志忠; 关键词：TOLL样受体免疫反应 KINASE PRRS 哺乳动物

猪IL-2基因在毕赤酵母中的高效表达及生物活性分析被引量：6: 2011年; 本研究根据密码子偏爱原则设计猪IL-2引物,克隆其基因后构建pPIC9k-IL-2重组表达载体,线性化后电转化毕赤酵母GS115,获得优化密码子的重组酵母转化子;再用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,不同条件下进行甲醇诱导表达。结果表明:经PCR鉴定IL-2基因已整合到酵母基因组中。表达产物经SDS-PAGE电泳分析发现相对分子质量为16、20ku两条目的蛋白表达带,脱糖基化分析表明目的蛋白得到了适度的糖基化修饰,Western blotting分析显示表达的蛋白具有良好的免疫反应性,分子筛纯化可以获得纯度为95%的蛋白质,淋巴细胞增殖活性分析表明所得的蛋白质具有促淋巴细胞增殖的活性。毕赤酵母表达系统可以高效地表达具有生物活性的重组猪IL-2蛋白分子。; 陈国华贾怀杰曾爽房永祥李小庆景志忠才学鹏; 关键词：毕赤酵母活性分析

Comparison of host gene expression profiling in spleen tissues of genetically susceptible and resistant mice during ECTV infection: <正>Ectromelia virus(ECTV)is a mouse-specific orthopoxvirus that is related closely to Variola virus and Monkey...; Wen-Yu ChengHuai-Jie JiaXiao-Bing HeZhi-Zhong Jing; 文献传递

猪白细胞抗原复合体Ⅰ类和Ⅱ类研究进展被引量：4: 2009年; 猪主要组织相容性复合体又称猪白细胞抗原复合体(SLA),是猪基因组中基因密度最高的区域之一,也是多态性最高的区域。许多研究表明SLA在抗原提呈及免疫调节等方面起着重要的作用,其基因及基因组学研究在以猪为替代模型的人-猪器官移植、癌症、变态反应、猪的生产数量性状及对感染性疾病的应答、疫苗研制等方面都是热点。我们就目前Ⅰ类和Ⅱ类SLA分子功能基因多态性及与机体免疫水平、抗病育种和生产性状的相关性作一综述。; 莫斯科房永祥冯海燕景志忠; 关键词：多态性抗病育种免疫水平

正痘病毒干扰宿主免疫应答的分子及其作用途径被引量：3: 2011年; 正痘病毒属的牛痘病毒、痘苗病毒以及猴痘病毒等成员是最重要的动物源性人兽共患病病原。作者围绕这些正痘病毒编码的干扰宿主免疫应答的分子及其作用途径,重点介绍了病毒阻断宿主干扰素反应、抑制宿主TNF诱导的反应以及失活宿主防御反应的免疫成分等策略,以加深对痘病毒感染的宿主特异性、免疫逃避以及致病的分子机制的理解。; 景志忠贾怀杰周涛何小兵; 关键词：病毒感染宿主免疫反应分子机制

猪繁殖障碍性疫病多重PCR诊断方法的建立及其应用被引量：6: 2010年; 根据GenBank已发表的猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的序列,经DNAstar生物学软件和BLAST序列分析,利用Oligo6.0软件分别设计并合成了4对特异性扩增引物.在初步优化单项PCR反应退火温度和反应体系的基础上,建立了同时检测CSFV、PCV2、PRRSV和PRV的多重PCR诊断方法.结果表明:该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性;对30份临床样品进行检测,结果发现,CSFV、PRRSV、PCV2和PRV的阳性率分别为46.7%、43.3%、53.4%、10.0%,其中,PRV与PCV2、CSFV与PCV2和CSFV与PRRSV混合感染的阳性率分别为6.7%、36.7%和10.0%;PRV、PCV2和PRRSV单一感染的阳性率分别为3.3%、10.0%和33.3%.说明所建立的多重PCR诊断方法,可以应用于CSFV、PRRSV、PCV2和PRV混合感染所引起的猪繁殖障碍性疫病的临床鉴别诊断.; 贾怀杰陈国华何小兵王晓霞房永祥窦永喜瞿惠玲景志忠; 关键词：猪瘟病毒猪圆环病毒2型猪繁殖与呼吸综合征病毒猪伪狂犬病毒

国家自然科学基金(30871884)

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