国家高技术研究发展计划(2002AA242061)
- 作品数：22 被引量：97H指数：5
- 相关作者：旭日干郭旭东王建国邵华毛舒燕更多>>
- 相关机构：内蒙古大学内蒙古农业大学中国科学院广州生物医药与健康研究院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划内蒙古自治区自然科学基金内蒙古自治区高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 应用RNAi干扰eGFP转基因小鼠胎儿成纤维细胞中FGF5基因的表达
- 2008年
- 在小鼠FGF5基因干扰的研究中,针对小鼠FGF5mRNA的第316～335bp区域、第499～518bp区域和第766～785bp区域分别设计了发夹式RNA干扰片段,并将干扰片段连接到带有H1启动子的红色荧光表达载体上,将载体以脂质体法转染到eGFP转基因小鼠胎儿成纤维细胞中,搜集转染后的细胞提取总RNA,并反转录成cDNA。用SYBRGREENⅠ荧光定量PCR方法对转染了不同干扰载体的细胞cDNA进行检测,结果干扰载体对eGFP转基因小鼠成纤维细胞中的FGF5表达有较强的抑制作用。
- 宝明涛郭旭东旭日干
- 关键词：RNAISHRNASYBRFGF5
- IGF-1毛囊特异表达载体的构建以及转染绒山羊胎儿成纤维细胞的研究被引量：18
- 2009年
- 本研究旨在构建绵羊胰岛素样生长因子l(IGF-1)毛囊特异表达载体pCDsR-KI,并转染绒山羊胎儿成纤维细胞,最终获得稳定表达红色荧光并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过RT-PCR方法获得IGF-1 cDNA,其与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成IGF-1毛囊特异表达载体pCDsR-KI(大小7.4 kb)。以组织块贴附法分离和培养绒山羊胎儿成纤维细胞,外源性表达载体以lipofectamineTM2000介导转染所培养的第2代成纤维细胞,在DMEM/F12+10%FBS、37℃、5%CO2中培养,并添加G418筛选,获得了表达红色荧光蛋白的细胞克隆。经PCR法鉴定证实外源基因已经整合在细胞基因组中。通过分析转基因体细胞的生长曲线和染色体核型证明转基因细胞的生长状态良好、各项参数趋于正常。为下一步通过体细胞核移植技术获得转基因克隆绒山羊准备了核供体细胞。
- 郭旭东尹俊杨东山毛舒燕宝明涛旭日干
- 关键词：绒山羊红色荧光蛋白胎儿成纤维细胞
- 内蒙古白绒山羊LDH-A基因cDNA的克隆与特性分析被引量：1
- 2008年
- 【目的】克隆内蒙古白绒山羊乳酸脱氢酶A(LDH-A)基因并分析其基本表达模式。【方法】采用RT-PCR和3′RACE技术克隆基因,将得到的基因cDNA序列及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。利用RT-PCR方法进行组织表达检测。【结果】获得了内蒙古白绒山羊LDH-A基因全长cDNA序列。该基因cDNA全长1 649 bp,包含一个996 bp的ORF和642 bp的3′UTR。SMART分析表明ORF编码的蛋白质具有Ldh_1_N domain和Ldh_1_C domain,Psite分析表明有L-乳酸脱氢酶活性位点,PSORT程序分析将其定位于细胞质中。LDH-A基因在脾、肾、睾丸和肌肉组织中均有表达。【结论】内蒙古白绒山羊LDH-A基因编码的蛋白具有典型的乳酸脱氢酶结构,cDNA核苷酸序列与牛的LDH-A基因(NM_174099.2)具有较高的同源性。在脾、肾、睾丸和肌肉组织中均有表达。
- 王志钢其布日包婵婵旭日干
- 关键词：基因克隆
- 卵丘细胞与卵母细胞解离对小鼠卵子体外成熟及受精的影响被引量：1
- 2007年
- 卵丘细胞与卵母细胞的解离会降低小鼠卵母细胞的成熟质量,该研究将解离所得裸卵用不同种成分明确的成熟培养液进行体外成熟、体外受精、体外发育,从而确定卵丘细胞与卵母细胞的解离对小鼠卵母细胞成熟、受精、发育的影响,并通过筛选建立起最优的试验体系,为去除卵丘细胞的卵母细胞体外成熟质量的提高及后续研究提供参考依据。结果显示,裸卵的成熟率与成熟培养液的选择密切相关,TYH组、HTF组极显著优于M199组、α-MEM组;卵丘细胞与卵母细胞的解离与否对受精率的影响是巨大的,解离后(10%～28%)与解离前(48%～76%)差异极为显著(P<0.01);卵丘细胞与卵母细胞的解离与否对发育率的影响未发现显著差别(P>0.05)。因此,卵丘细胞与卵母细胞的解离主要影响了小鼠卵母细胞的体外受精率,通过选用适当的培养液可以相对改善该情况。
- 茫烈邵华王凤武旭日干
- 关键词：小鼠体外成熟体外受精
- 舍饲绒山羊布鲁氏菌病和蓝舌病血清流行病学调查被引量：2
- 2008年
- 为了查明某绒山羊舍饲基地绒山羊流产、早产,羔羊死亡的病因。按国家布鲁氏菌病和蓝舌病检疫规程,采用血清凝集试验和琼脂扩散试验,对该绒山羊舍饲基地舍饲的绒山羊及其周边养殖户放养的绒山羊进行了布鲁氏菌病和蓝舌病血清流行病学调查。结果显示:舍饲绒山羊布鲁氏菌病和蓝舌病血清抗体阳性率分别为12.6%和21.9%;放养绒山羊布鲁氏菌病和蓝舌病血清抗体均为阴性。结果表明:该绒山羊舍饲基地舍饲的绒山羊中存在布鲁氏菌病和蓝舌病,应采取有效的综合防治措施加以控制。
- 杨莲茹关平原杨晓野王建国禹旺盛王志旭日干
- 关键词：绒山羊布鲁氏菌病蓝舌病血清流行病学调查
- “两步法”体外培养山羊卵母细胞的超微结构观察被引量：1
- 2006年
- 有假说认为,卵母细胞在体外培养过程中,如果延长GV期,可促进卵母细胞进一步成熟,因而提高发育潜能。采用山羊半卵泡和卵母细胞共培养,抑制卵母细胞GVBD发生,从而延长GV期。比较了共培养前后和恢复成熟培养后卵母细胞的超微结构变化,其目的从亚细胞水平寻找卵母细胞进一步成熟的证据。研究发现,常规成熟培养:有卵周隙存在,但不贯通,局部区域卵膜与透明带结合紧密;部分皮质区尚有细胞器存在;微绒毛大部分从透明带中撤出,倒伏于质膜表面,数量较多,形态较为粗大;皮层颗粒质膜下部分单层分布,部分散布于皮质区;线粒体均匀散布于卵质中央区。共培养前:卵母细胞的卵周隙尚未形成,微绒毛没有从透明带中撤出;线粒体等细胞器分布于皮质区,皮层颗粒成簇状分布,皮质区富含细胞器。共培养后:局部形成卵周隙,微绒毛已自透明带中撤出,数量较多,垂直或倒伏于卵膜表面;线粒体以簇状分批开始内移,皮层颗粒已部分单层分布于质膜下,部分皮质区缺乏细胞器。恢复成熟培养后:卵周隙进一步扩大并且贯通,微绒毛数量减少并且绝大多数垂直于卵膜;线粒体在卵质中央区均匀分布,皮层颗粒卵膜下单层分布,大部分皮质区无细胞器存在。利用“两步法”培养得到的卵母细胞与体外常规成熟培养的卵母细胞相比,更有利于皮层颗粒的质膜下单层分布,卵母细胞卵周隙的形成与贯通,微绒毛数量减少和垂直于卵膜表面,无细胞器皮层区的进一步形成。因此,更有利于卵母细胞胞质的进一步成熟。
- 邵华孟和宝力高其木格张锁链旭日干
- 关键词：山羊卵母细胞两步法共培养透射电子显微镜超微结构
- 国产丝裂霉素处理的胎儿成纤维细胞支持具有生殖系转化能力的小鼠胚胎干细胞的分离
- 2007年
- 应用于胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)培养的国产药物可以降低ES细胞的实验成本。研究中以浙江海正药业生产的丝裂霉素(mitomycin,国药准字H33020786)处理小鼠胎儿成纤维细胞,用于胚胎干细胞建系。并制备饲养层,将小鼠囊胚种植在该饲养层上。4-6天后,挑选形态良好的内细胞团(inner cell mass)来源的克隆在胰酶中进行消化,将消化下来的细胞团块传至新鲜的饲养层上。之后,每2-3天传代一次。结果表明,经该丝裂霉素处理的胎儿成纤维细胞支持具有生殖系嵌合能力的胚胎干细胞的分离。
- 魏著英邵华刘东军旭日干
- 去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞体外成熟过程中的超微结构变化被引量：7
- 2006年
- 去除卵丘细胞会降低小鼠卵母细胞的成熟质量。利用透射电子显微镜技术观察去卵丘细胞的小鼠卵母细胞体外成熟过程中的超微结构变化,目的是在亚细胞水平上寻找由于卵丘细胞的去除而导致卵母细胞质量降低的原因。结果显示,成熟培养过程中微绒毛逐步从透明带内撤出,并竖直于卵膜表面;卵周隙逐步形成;线粒体由成簇到散布于卵质内;皮层颗粒由多到数量极少。因此,皮层颗粒的减少或继续生成路径的障碍可能是去除卵丘细胞的小鼠卵子成熟质量降低的重要原因。
- 邵华茫烈其木格魏著英王玲玲段彪王凤武王建国刘东军旭日干
- 关键词：卵母细胞超微结构
- EGFP小鼠ES细胞来源的生殖系嵌合小鼠的获得和鉴定被引量：1
- 2007年
- 生殖系嵌合体的获得是实现ES细胞介导的转基因途径的决定步骤,而嵌合体的制作及生殖系嵌合体的获得则是判定ES细胞系是否具有配子分化能力的有效方法。利用一株表达绿色荧光蛋白的杂种ES细胞系制备出嵌合体小鼠,共获得9只表达绿色荧光蛋白的嵌合体小鼠,其中有8只雄性, 1只雌性,目前均发育成健康成年小鼠。流式细胞检测显示了绿色荧光蛋白在嵌合鼠以下器官的表达情况:心(77.96±15.78) %、脾(84.06±3.60) %、肾(42.49±19.79) %、骨髓(52.02±18.78) %。昆明雌鼠与雄性嵌合鼠杂交1代(F1)毛色表型分析显示该株ES细胞具有生殖系嵌合能力。
- 段彪邵华魏著英王凤武旭日干
- 关键词：嵌合体生殖系
- 内蒙古绒山羊CDK2基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2008年
- 采用同源序列克隆技术结合RT-PCR和RACE技术,首次从内蒙古绒山羊睾丸组织中克隆出羊CDK2基因的全长cDNA序列(GenBank登录号为EF035041)。结果显示:羊CDK2基因的cDNA序列长为1 355 bp,5′端非翻译区为174 bp,3′端非翻译区为266 bp,开放阅读框为894 bp,编码298个氨基酸。与牛CDK2基因cDNA序列同源性为98%,氨基酸序列完全一致;和其他哺乳动物CDK2基因的cDNA序列同源性也达92%以上;氨基酸序列同源性为93%以上。说明CDK2在结构和功能上有很高的保守性。
- 关泽红旭日干赵燕芳毕力格
- 关键词：内蒙古绒山羊克隆RACE
