广东省自然科学基金(021195)
- 作品数：58 被引量：225H指数：10
- 相关作者：张洹何冬梅费嘉刘革修蒋建伟更多>>
- 相关机构：暨南大学广东省人民医院中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广州市科技计划项目国家攀登计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- VEGF siRNA致中国仓鼠肺细胞染色体畸变的研究
- 2011年
- 目的研究VEGF siRNA对中国仓鼠肺细胞(CHL)的染色体畸变作用。方法采用25、50和100nmol/L的VEGF siRNA转染中国仓鼠的肺细胞,分别观察24h、48h后的染色体畸变情况。结果在VEGF siRNA转染24小时,仅100nmol/L VEGF siRNA产生可疑阳性反应,其染色体的畸变率为6%;在VEGF siRNA转染48小时后,50nmol/L的VEGF siRNA和100nmol/L的VEGF siRNA均产生可疑阳性反应,染色体的畸变率分别为6%和10%。而25nmol/L的VEGF siRNA无论是在转染后24h还是48h,均未产生染色体的畸变作用。VEGF siRNA产生的染色体畸变类型有断裂、双着丝粒、多倍体、裂隙、三射体。结论 100nmol/L的VEGF siRNA分子可引起CHL细胞产生染色体畸变。
- 荆春霞张洹杨光吴赤蓬何林
- 关键词：血管内皮生长因子VEGFSIRNA染色体畸变
- 受体介导的c-myc反义核酸抑制肝癌Bel-7402细胞增殖的机制被引量：1
- 2006年
- 目的探讨半乳糖受体介导的c-myc反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)抑制肝癌Bel-7402细胞增殖的机制。方法c-mycASODN与半乳糖(galactose,Gal)-聚乙烯亚胺(poly-ethyleneimine,PEI)相作用形成Gal-PEI-ASODN复合物,作用于人肝癌Bel-7402细胞,通过流式细胞仪检测细胞周期、AnnexinV-FITC和碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)双染色、DNA电泳实验观察Gal-PEI-ASODN对Bel-7402细胞的作用。结果采用流式细胞仪检测细胞周期,细胞对照组、Gal-PEI对照组、ASODN对照组,细胞增殖指数分别为35.04%、33.95%、32.90%,Gal-PEI-ASODN组细胞增殖指数为23.65%,与细胞对照组相比,sub-G1期+G0/G1期细胞总数从64.03%增加到76.74%,S期+G2/M期的细胞从35.04%减少为23.65%,Gal-PEI-ASODN组细胞增殖指数下降11.39%,差异显著(P<0.01)。采用细胞凋亡检测试剂AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞坏死情况,细胞对照组细胞凋亡率2.77%,坏死率3.06%,正常细胞率94.13%;ASODN对照组、Gal-PEI对照组细胞凋亡率均在4%以下,坏死率均在6.8%以下;Gal-PEI-ASODN组细胞凋亡率6.5%,坏死率15.9%,正常细胞率下降为76%。DNA电泳实验中,Gal-PEI-ASODN组未发现细胞凋亡的DNA梯形条带,相反出现了弥散条带。结论半乳糖受体介导的c-myc反义核酸通过阻止细胞从G0/G1期细胞向S期的转变,诱导细胞坏死,达到抑制细胞Bel-7402增殖的作用。
- 蒋建伟张洹
- 关键词：反义核酸肝癌坏死
- RNA干涉及其在肿瘤研究中的应用被引量：2
- 2004年
- RNAi是双链RNA介导的转录后基因沉默的过程,是一种高效的高特异性抑制基因表达的新途径。通过双链小干涉RNA(siRNA)与一系列蛋白质结合形成siRNA诱导的沉默复合体(RISC)并活化,然后,RISC对靶基因进行识别、降解。与反义方法相比,siRNA具有更好的抑制效果。RNAi的应用将为癌症的基因治疗提供新的方法。
- 何冬梅张洹
- 关键词：RNA干涉小干涉RNA肿瘤
- 三氧化二砷诱导Raji细胞凋亡过程中端粒酶活性和hTERT、bcl-2基因表达的研究被引量：13
- 2005年
- 目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导Raji细胞凋亡并初步探讨端粒酶活性、人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因及bcl-2基因表达之间的关系。方法:通过姬姆萨染色来观察细胞的凋亡;以RT-PCR分析bcl-2、hTERT基因的mRNA表达水平;利用半定量多聚酶链反应-酶联免疫反应(PCR-ELISA)方法检测As2O3处理Raji细胞前后端粒酶活性的改变。结果:2μmol/LAs2O3能诱导Raji细胞凋亡,2μmol/LAs2O3作用于Raji细胞8h、12h、24hhTERTmRNA相对表达量分别与对照组比较有显著差异(P<0.05),12h、24hbcl-2mRNA相对表达量分别与对照组比较有显著差异。2μmol/LAs2O3作用48h后,Raji细胞中端粒酶活性即出现下降,作用72h、96h,端粒酶的活性明显受到抑制,吸光度分别为0.829、0.328、0.291,分别与空白对照组比较有显著差异(P<0.05)。结论:As2O3诱导Raji细胞凋亡过程中,端粒酶活性下调与hTERT、bcl-2基因mRNA表达下降有关。
- 何冬梅张洹刘革修余卫
- 关键词：三氧化二砷RAJI细胞HTERT基因BCL-2基因细胞凋亡
- 血管内皮生长因子基因反义核酸体外抑制K562细胞生长及机理研究被引量：4
- 2004年
- 目的 :探讨血管内皮生长因子 (VEGF)反义核酸抑制K5 6 2细胞生长的机理 ;以及反义药物的量效和时效关系 ,揭示VEGF基因新的功能。方法 :用反义核酸X7,2 0 -mer,全硫代修饰 ;以脂质体介导进行转染 ,细胞培养72h ,用MTT法计算细胞生长抑制率 ,采用台盼蓝拒染法每 2 4h观察细胞存活情况并计数 ,用Giemsa染色观测细胞形态学改变 ,用流式细胞仪检测细胞凋亡百分数。结果 :反义药物对K5 6 2细胞生长有明显抑制作用 ,呈剂量依赖关系 ,并且下调VEGF蛋白的表达 ,反义药物对K5 6 2细胞的凋亡无影响。结论 :VEGF反义药物抑制K5 6 2细胞生长的机理是抑制细胞增殖 ,而不是促进细胞凋亡 ,内源性VEGF蛋白具有促进K5 6
- 费嘉张洹韩忠朝
- 关键词：血管内皮生长因子K562细胞寡核苷酸类反义
- 人端粒酶逆转录酶基因反义核酸对CEM细胞系端粒酶活性的影响被引量：1
- 2003年
- 为了探讨人端粒酶逆转录酶 (humantelomerasereversetranscriptase ,hTERT)基因的全硫代修饰反义寡核苷酸 (antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotide ,ASODN)对CEM细胞端粒酶活性的影响 ,采用端粒酶聚合酶链反应 酶联免疫测定法检测CEM细胞的端粒酶活性 ,采用逆转录 聚合酶链反应方法检测hTERT基因mRNA的表达水平 ,以间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白表达含量的变化。结果显示 :hTERTASODN作用于CEM细胞后 ,hTERTmRNA表达水平明显降低 ;ASODN与CEM细胞共同孵育 48小时 ,hTERT蛋白表达阳性率降为 (40 .43± 2 .0 7) % ,72小时hTERT蛋白表达阳性率降为 (15.2 6± 2 .74) % ,而hTERT正义核酸作用CEM细胞 2 4,48,72小时 ,对hTERTmRNA及蛋白表达水平均无影响 ;hTERT基因ASODN作用于CEM细胞48,72小时 ,其端粒酶活性明显降低 ,分别与正义寡核苷酸组、空白对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 5)。结论
- 李文瑜张洹何冬梅
- 关键词：HTERT反义寡核苷酸端粒酶CEM细胞
- 细胞周期与细胞凋亡共同的调控分子——Survivin蛋白(综述)被引量：18
- 2003年
- 细胞周期与细胞凋亡是有着紧密联系的生命活动。尽管凋亡调控蛋白常常牵涉到细胞周期的调控,但是细胞周期与细胞凋亡共同的的调控分子却很少见。一个新的抗凋亡蛋白———Sur vivin蛋白,最近被发现同时具有调控细胞凋亡和细胞周期的双重功能,这为细胞周期与细胞凋亡之间存在紧密联系提供了有力的证据。另一方面,它的表达和分布特点对细胞增殖非常有利,提示Survivin蛋白可能是快速增殖细胞(如癌细胞)重要的调控分子。
- 余卫张洹
- 关键词：SURVIVIN蛋白细胞周期细胞凋亡
- 三氧化二砷对肝癌细胞生长抑制作用差异性探讨被引量：11
- 2004年
- 目的 :观察三氧化二砷对肝癌SMMC - 772 1和BEL - 74 0 2细胞生长抑制作用差异性并且探讨其可能的作用机理。方法 :应用细胞培养和台盼蓝拒染法观察不同时间和不同浓度的三氧化二砷对肝癌细胞SMMC - 772 1和BEL - 74 0 2细胞生长的抑制作用 ,比较生长抑制率的差异并用谷胱甘肽检测试剂盒测定两种肝癌细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量。结果 :三氧化二砷浓度为 0 5 0 μmol/L、作用时间为 2 4h可显著抑制肝癌细胞系BEL - 74 0 2的生长 ,抑制作用呈时间、剂量依赖性 ;对SMMC - 772 1细胞 ,三氧化二砷浓度为 2 0 0 μmol/L、作用时间为 2 4h才出现抑制细胞生长作用 ,二者的生长抑制率存在显著差异 ,0 2 5 - 2 0 0 μmol/LAs2 O3 作用 72h后 ,BEL - 74 0 2细胞的生长抑制率均高于SMMC - 772 1细胞 (P <0 0 5 )。检测SMMC - 772 1和BEL - 74 0 2细胞内GSH含量分别为 (5 0 8± 5 2 ) μmol/gprotein和 (18 7± 1 4 ) μmol/gprotein ,存在明显差异。 结论 :三氧化二砷抑制肝癌细胞SMMC - 772 1和BEL - 74 0 2的生长存在显著的差异 ;BEL - 74 0 2细胞对三氧化二砷非常敏感性 ,可能与其细胞内谷胱甘肽含量较低 。
- 任玮玮李弘张洹
- 关键词：三氧化二砷谷胱甘肽SMMC-7721细胞BEL-7402细胞
- NHE-1基因的异常表达对肿瘤细胞的影响
- 2004年
- 张轸武张洹
- 关键词：肿瘤
- 血管内皮生长因子反义核酸与高三尖杉酯碱联用对白血病细胞的增敏效应被引量：4
- 2005年
- 目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义核酸与高三尖杉酯碱(homoharringtonin ,H)联用,对HL6 0和K5 6 2细胞药物敏感性的影响。方法 采用实验筛选所得的最优反义核酸(A7) ,2 0mer,全硫代修饰;以脂质体介导进行转染2 4h开始加入高三尖杉酯碱,继续培养4 8h ,共72h ,用MTT法计算细胞生长活力,求IC50 值,用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白的浓度,用Giemsa染色观察细胞凋亡形态学改变,用流式细胞仪检测细胞凋亡百分数。结果 VEGF反义核酸可显著降低对HL6 0和K5 6 2细胞H的IC50 值,下调VEGF蛋白的表达,增加H诱导的HL6 0和K5 6 2细胞凋亡。结论 VEGF反义核酸与H联用对HL6 0和K5 6 2细胞具有增敏效应,VEGF反义核酸可增强H诱导的凋亡作用;同时反证内源VEGF蛋白具有降低HL6 0和K5 6 2细胞对H的敏感性。
- 费嘉张洹
- 关键词：血管内皮生长因子反义核酸高三尖杉酯碱白血病细胞
