安徽省优秀青年科技基金(2010SQRL082)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
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- 相关领域：农业科学更多>>
- PRRS聚乳酸乙醇酸微粒DNA疫苗的制备及其免疫原性被引量：2
- 2013年
- 为增强DNA疫苗的免疫效果,采用溶媒挥发法制备聚乳酸乙醇酸[poly(lactide-co-glycolide)(PLGA)]微粒,将猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)DNA疫苗pCI-ORF5吸附到该微粒表面,检测PLGA微粒对DNA的吸附量、体外释放情况以及在小鼠体内的免疫原性。结果表明在6h内PLGA微粒的DNA吸附量可达到0.9%,在体外的释放情况受到CTAB含量、PLGA分子量、PLGA浓度和内水相体积等诸多因素的影响。与裸DNA疫苗同时免疫小鼠后,发现PLGA微粒可显著增强所吸附DNA疫苗诱导的体液免疫和细胞免疫,显示其作为载体递送DNA疫苗方面具有较好的应用前景。
- 张辉王光利韩秀英周磊
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征DNA疫苗聚乳酸乙醇酸
- 猪外周血树突状细胞的体外培养及鉴定
- 2011年
- 从猪外周血中分离获得单核细胞,分别加入150μg/L pGM-CSF和100U/mL pIL-4,体外培养6d后诱导出大量树突状细胞(Dendrictic cell,DC),通过显微镜观察,可见其细胞表面具有典型的树突状突起,呈毛刺状。在培养末期加入TNF-α后可促进DC进一步成熟,其表面高水平表达MHCⅡ、CD80/86和CD16。猪DC的体外获得将为进一步研究许多病毒性疾病的致病机理奠定的基础。
- 张辉曹曼丽王贝贝蔡振东
- 关键词：体外
- 猪树突状细胞的体外扩增
- 2010年
- 树突状细胞(DC)是一类专职的抗原提呈细胞,在激发机体初始免疫反应和调节T细胞介导的免疫反应中都发挥十分重要的作用,但至今对猪DC的了解较少.本研究从猪外周血中分离获得单核细胞,分别加入150ng/mLpGM-CSF和100U/mL pIL-4,体外培养6 d后诱导出大量DC,通过显微镜观察可见其细胞表面具有典型的树突状突起,呈毛刺状.猪DC的体外获得将为进一步研究许多病毒性疾病的致病机理奠定坚实的基础.
- 张辉曹曼丽王贝贝
- 关键词：树突状细胞体外
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白糖基化位点缺失突变株的构建被引量：4
- 2012年
- 以含有猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)VR-2332株全长感染性cDNA克隆的质粒pVR2332为模板,通过融合PCR方法扩增GP5蛋白第34、51位天冬酰胺糖基化位点缺失的突变序列,替换pVR2332质粒中编码GP5蛋白的DNA片段,分别获得重组质粒pVR-N34A、pVR-N51A。在体外转录后转染BHK-21细胞,转染后第48小时收集细胞接种Marc-145细胞,进行突变病毒的拯救。然后通过RT-PCR扩增拯救病毒GP5蛋白的编码序列,序列分析显示构建正确。间接免疫荧光试验证明拯救病毒能够正常表达GP5蛋白。同时,中和试验结果初步表明GP5糖基化位点缺失影响PRRSV与中和抗体的反应。猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白不同糖基化位点缺失突变株的获得将为进一步揭示GP5蛋白糖基化与诱发机体免疫反应之间的关系奠定基础。
- 张辉王光利徐大勇李峰徐争辉
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆GP5蛋白糖基化
- 伪狂犬病病毒Ea株UL14基因的真核表达和功能域分析
- 2010年
- 通过PCR方法扩增伪狂犬病病毒(PRV)Ea株UL14基因,克隆到pEGFP-C1载体中,构建EG-FP-UL14融合的真核表达质粒pEGFP-UL14。将pEGFP-UL14转染Hela细胞,并与对照质粒pEGFP-C1进行比较,发现EGFP-UL14融合蛋白在转染后第48小时荧光主要分布在胞浆,但随着时间的延长,荧光逐渐向细胞核中转移,在转染后第72小时完全定位于核中。为进一步分析UL14蛋白的细胞定位功能域,构建了一系列UL14C-端、N-端缺失突变体。将上述突变体分别与EGFP融合,构建了UL14不同区域与EG-FP融合的重组表达质粒,分别转染Hela细胞后,证实UL14的第37～65位氨基酸对其细胞定位具有重要作用。研究结果为进一步阐明PRV UL14的功能奠定了基础。
- 张辉王贝贝李奇刘凯
- 关键词：伪狂犬病病毒真核表达
