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国家教育部博士点基金(20070335049)
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赵国华
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张宝荣
严雅萍
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pEGFP-SPAST真核表达载体的构建及遗传性痉挛性截瘫的发病机制研究
2013年
目的构建野生型和突变型SPAST真核表达载体,研究SPAST基因突变所致遗传性痉挛性截瘫的发病机制。方法建立野生型pEGFP-SPAST基因表达载体,采用overlapPCR方法构建突变型pEGFP-SPAST真核表达载体。细胞转染野生型和突变型pEGFP-SPAST真核表达载体,观察野生型和突变型spastin蛋白在COS-7细胞中的表达,采用免疫荧光染色技术观察spastin蛋白与微管、线粒体的定位关系。结果野生型和突变型spastin蛋白均在细胞质中表达。免疫荧光检测发现野生型和突变型spastin蛋白均不与微管共定位,也均不与线粒体共定位。结论成功构建了野生型和突变型pEGFP-SPAST真核表达载体。突变型spastin蛋白不改变其细胞质定位。功能研究提示spastin蛋白可能不直接调控微管功能和线粒体功能。
严雅萍
浦佳丽
张宝荣
赵国华
关键词:
遗传性痉挛性截瘫
真核表达载体
细胞质
微管
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