国家自然科学基金(81373653)
- 作品数：9 被引量：92H指数：6
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- 相关机构：广州中医药大学广州中医学药大学附属深圳平乐骨伤科医院广州中医药大学附属骨伤科医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Bak1腺病毒表达载体的构建及对人成骨肉瘤细胞的影响被引量：1
- 2018年
- 目的构建人Bcl2拮抗1(Bak1)基因重组表达腺病毒pAd-Bak1,并感染人成骨肉瘤细胞MG63建立过表达Bak1的细胞模型,检测其对细胞活性的影响。方法利用qPCR扩增Bak1全长cDNA,利用穿梭质粒pENTER构建载有Bak1基因的重组穿梭质粒pENTER-Bak1,通过基因测序鉴定载体序列。将重组载体PmeⅠ线性化、脱磷酸化后,转入含有腺病毒骨架质粒pAd-Amp的感受态BJ5183细胞中进行基因同源重组。将重组腺病毒质粒pAD-Bak1经PacⅠ酶切线性化后,用Lipofectamine 2000脂质体转染到HEK-293细胞中进行包装扩繁,荧光定量PCR法测定病毒滴度。感染MG63细胞,qPCR和Western blot检测Bak1的表达,MTT检测细胞活性。结果测序及酶切验证pENTER-Bak1构建成功。pAD-Bak1感染MG63细胞,qPCR检测到细胞中Bak1基因过表达(与NC对照组和空白对照组相比P<0.01、P<0.01),Western blot检测到细胞中Bak1蛋白过表达。MTT检测显示与NC对照组相比,细胞活性减弱(P<0.05)。结论成功构建了Bak1重组表达腺病毒,验证了其能够感染MG63细胞表达Bak1蛋白,证明了过表达Bak1可以减弱细胞的活性。为进一步研究Bak1的功能奠定了基础。
- 柴爽黄红万雷王吉利王伟黄宏兴
- 关键词：重组腺病毒载体
- Bcl2促进UMR-106细胞BMP-2、OPG表达及补肾健脾活血方对其影响被引量：7
- 2018年
- 目的基于构建Bcl2沉默和过表达腺病毒观察Bcl2对成骨细胞骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)蛋白的调节作用及补肾健脾活血方对其影响。方法将培养的UMR-106细胞分为空载腺病毒组(沉默Bcl2空载腺病毒NC-bcl2,过表达Bcl2空载腺病毒WT-bcl2)、Bcl2腺病毒组(沉默Bcl2腺病毒sh-bcl2,过表达Bcl2腺病毒Ad-bcl2),空载腺病毒+空白血清组(NC-bcl2,WT-bcl2)、空载腺病毒+补肾健脾活血方含药血清组(NC-bcl2+ME,WT-bcl2+ME)、腺病毒+空白血清组(sh-bcl2,Ad-bcl2)、腺病毒+补肾健脾活血方血清组(sh-bcl2+ME,Ad-bcl2+ME),用RT-q PCR检测Bcl2、OPG mRNA的变化、应用免疫印迹(Western Blot)检测Bcl2、OPG、BMP-2的变化。结果 (1)荧光倒置显微镜观察包装腺病毒转染UMR-106细胞;(2)在正常培养基中,与NC-bcl2比较,sh-bcl2可以降低Bcl2、OPG、BMP-2蛋白的表达(P均<0.05),与WT-bcl2比较,Ad-bcl2可以提高Bcl2、OPG、BMP-2蛋白的表达(P均<0.05);(3)与NC-bcl2比较,RTq PCR显示sh-bcl2可以降低Bcl2 mRNA的表达,但OPG mRNA无统计学意义;(4)在大鼠血清干预中,与空载腺病毒比较,补肾健脾活血方含药血清均可以增加BMP-2、OPG蛋白表达(P均<0.05);在sh-bcl2干预的细胞中,补肾健脾活血方含药血清提高BMP-2、OPG蛋白的表达(P均<0.05);在Ad-bcl2干预的细胞中,中药干预后,BMP-2、OPG未见明显变化。结论 Bcl2可以影响BMP-2、OPG蛋白的表达,补肾健脾活血方可能通过作用于Bcl2影响成骨细胞成骨相关蛋白的表达。
- 王吉利王吉利张志海黄宏兴万雷刘海全汪悦东
- 关键词：补肾健脾活血方骨形态发生蛋白2
- Hedgehog信号通路与骨质疏松症被引量：15
- 2014年
- Hedgehog信号通路是一条保守而重要的信号通路,涉及到多种细胞的增殖和分化活动。近年研究发现,Hedgehog信号通路可以通过上调Runx2和Osx等主要转录因子的表达促进间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向成骨细胞分化,并且抑制MSCs向脂肪细胞分化。Hedgehog信号通路还可以通过调节细胞周期蛋白促进成骨细胞增殖。本文综述总结了Hedgehog信号通路调节成骨细胞增殖分化的作用机制,认为Hedgehog信号通路通过促进成骨细胞增殖分化参与调节骨代谢,为骨质疏松症的治疗提供一种新思路。
- 罗明黄宏兴黄红李泽钿赖圆圆
- 关键词：HEDGEHOG信号通路成骨分化骨质疏松症
- 补骨脂对成骨细胞和破骨细胞增殖分化的影响研究进展被引量：11
- 2020年
- 骨质疏松症是一种以骨量减少、骨微结构破坏,导致骨脆性增加,易于发生骨折为特征的全身性骨骼疾病。骨质疏松的发病机制为骨重建动态平衡被破坏,成骨细胞与破骨细胞功能失衡,导致骨代谢失衡,骨吸收加快,骨形成减少,最终造成骨吸收远大于骨形成,净骨量丢失。骨质疏松的形成与成骨细胞和破骨细胞二者在体内的动态平衡密切相关,其中破骨细胞主要介导骨吸收,在骨骼的形成和骨密度的调节中发挥着重要作用;成骨细胞则是特殊的骨形成细胞,能合成骨基质,调节机体的骨矿化,参与骨重塑等活动。
- 林燕平黄佳纯陈桐莹黄宏兴刘少津万雷
- 关键词：补骨脂成骨细胞破骨细胞增殖分化
- 黄宏兴教授辨治骨质疏松症经验介绍被引量：18
- 2016年
- 黄宏兴教授认为骨质疏松症的主要病因病机为肾虚、脾虚、血瘀。化繁为简提出骨质疏松症的三种临床证型:肝肾阴虚、脾肾阳虚、气滞血瘀。运用补肾健脾活血方加减改善患者症状的同时,指导患者适当进行户外活动有助于人体阳气的提升,促进气血运行,进而提高骨质疏松症患者的生活质量水平。
- 曾国勇万雷王凡黄宏兴
- 关键词：骨质疏松骨痿辨证论治
- 山茱萸新苷Ⅰ对成骨细胞的增殖及成骨分化的影响被引量：31
- 2020年
- 目的基于Wnt信号通路及内质网应激研究山茱萸新苷Ⅰ对大鼠原代成骨细胞的增殖及成骨分化的影响。方法提取原代成骨细胞,CKK8实验检测在药物浓度下山茱萸新苷Ⅰ对成骨细胞增殖的影响;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测不同浓度山茱萸新苷Ⅰ干预下成骨细胞ALP的活性情况;Real-time PCR检测Wnt2、β-catenin、BMP2、OPG、NOX4、PERK基因mRNA的表达;Western blot检测Wnt2、β-catenin、PDI、CHOP和BIP蛋白表达量。结果CKK8实验及ALP染色表明山茱萸新苷Ⅰ对成骨细胞增殖及分化有一定影响,不同浓度山茱萸新苷Ⅰ干预下成骨细胞出现不同程度的增殖;与空白对照组相比,山茱萸新苷Ⅰ组的Wnt2、BMP2、β-catenin、OPG、NOX4的mRNA表达水平显著升高(P<0.01),而PERK明显降低(P<0.01)。与空白对照组相比,山茱萸新苷Ⅰ组的成骨细胞Wnt2、β-catenin、PDI蛋白表达量显著升高(P<0.01),CHOP表达亦有轻微上升,但不明显(P>0.05),而BIP的蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论山茱萸新苷Ⅰ浓度为1 mmol/mL时在促进成骨细胞的增殖分化的作用上表现最佳,其能显著升高成骨细胞Wnt2、BMP2、β-catenin、OPG和NOX4的mRNA表达水平,而降低PERK的mRNA表达水平,升高Wnt2、β-catenin、PDI的蛋白表达量,降低BIP的表达量,在山茱萸新苷Ⅰ的干预下,Wnt信号通路及内质网应激途径对成骨活动的发生发展起着重要作用。
- 黄佳纯林燕平陈桐莹柴爽黄宏兴
- 关键词：骨质疏松成骨细胞内质网应激动物实验
- 补骨脂素对酒精性成骨细胞凋亡的影响被引量：6
- 2018年
- 目的：观察补骨脂素干预酒精性成骨细胞凋亡的影响。方法：体外分离培养成骨细胞,随机分为四组：空白组、酒精组、补骨脂素组及补骨脂素＋酒精组,利用ALP染色观察细胞凋亡形态学改变、FITC-Annexin V/PI凋亡检测凋亡细胞的发生率。结果：四组中酒精组成骨细胞凋亡率最高,其次是酒精＋补骨脂素组,再次是补骨脂素组,最后是空白组,四组之间两两比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：根据实验结果,说明酒精能促进成骨细胞凋亡,酒精组凋亡率最高,而在补骨脂素加入酒精组后,成骨细胞凋亡率明显降低,说明补骨脂素能延缓成骨细胞的凋亡。
- 王广伟霍力为黄红黄宏兴庾伟中万雷
- 关键词：补骨脂素酒精成骨细胞凋亡
- 抑制Dickkopf-1和Sclerostin表达对人成骨肉瘤细胞MG63骨代谢调节相关蛋白表达水平的影响被引量：4
- 2016年
- 目的:观察抑制Dickkopf-1和Sclerostin表达对人成骨肉瘤细胞MG63骨代谢调节相关蛋白表达水平的影响。方法:培养MG63细胞,构建沉默Dickkopf-1重组腺病毒载体和沉默Sclerostin重组腺病毒载体。将培养好的MG63细胞(每孔2×105个)分为4组,Scr组以Scr腺病毒转染、Dickkopf-1组以沉默Dickkopf-1重组腺病毒载体转染、Sclerostin组以沉默Sclerostin重组腺病毒载体转染、Dickkopf-1+Sclerostin组以沉默Dickkopf-1重组腺病毒载体和沉默Sclerostin重组腺病毒载体共同转染。各组MG63细胞转染重组腺病毒48 h后以Western Blot法测定各组细胞中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、低密度脂蛋白受体相关蛋白-5(low density lipoprotein receptor-related protein-5,Lrp-5)、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)、Runt相关转录因子-2(Runt-related transcription factor-2,Runx-2)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等骨代谢调节相关蛋白的表达水平。结果:Dickkopf-1组的OPG表达量与Scr组、Sclerostin组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.050,P=0.196);Sclerostin组、Dickkopf-1+Sclerostin组的OPG表达量均高于Scr组(P=0.010,P=0.000);Dickkopf-1组和Sclerostin组的OPG表达量均低于Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000,P=0.000)。Dickkopf-1组、Sclerostin组、Dickkopf-1+Sclerostin组的Lrp-5表达量均高于Scr组(P=0.012,P=0.010,P=0.000);Dickkopf-1组的Lrp-5表达量与Sclerostin组比较,差异无统计学意义(P=0.119);Dickkopf-1组和Sclerostin组的Lrp-5表达量均低于Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000,P=0.000)。Dickkopf-1组的BMP-2表达量与Scr组比较,差异无统计学意义(P=0.185);Dickkopf-1组的BMP-2表达量低于Sclerostin组(P=0.037);Dickkopf-1组和Sclerostin组的BMP-2表达量均低于Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000,P=0.000)。Dickkopf-1组、Sclerostin�
- 王吉利万雷张志海黄宏兴黄红肖本浩魏合伟曾国勇
- 关键词：DICKKOPF-1SCLEROSTINMG63细胞
- 过表达雌激素相关受体α干预沉默Bak1、Bcl2重组腺病毒载体转染MG63细胞的增殖与分化被引量：2
- 2019年
- 背景:雌激素缺乏是绝经后骨质疏松症的主要发病机制,而关于雌激素相关受体α(estrogen-relatedreceptor alpha,ERRα)与骨质疏松症的相关性研究较少,ERRα在骨质疏松症中的具体作用及其机制在目前尚不明确。目的:研究过表达ERRα对沉默Bak1、Bcl2重组腺病毒载体转染的MG63细胞和相关蛋白的影响。方法:构建过表达ERRα和沉默Bak1、Bcl2腺病毒载体,将培养好的MG63细胞分成空载病毒组、Ad-shBak1组、Ad-sh Bcl2组、Ad-shBak1+shBcl2组,过表达ERRα进行干预。MTT法检测细胞增殖,考马斯亮蓝蛋白定量检测碱性磷酸酶活性,流式法测定钙离子浓度,Western blot法分析骨调节蛋白(骨形态发生蛋白4、结缔组织生长因子、骨桥蛋白、Runt相关转录因子2、肿瘤坏死因子α)的表达。结果与结论:(1)与空载病毒组对比,Ad-shBak1组的细胞活性、碱性磷酸酶活性均升高,钙离子浓度降低,各骨调节蛋白除肿瘤坏死因子α降低外,其余均升高;Ad-shBcl2组细胞活性、碱性磷酸酶活性、结缔组织生长因子均降低,但无显著性意义(P> 0.05),钙离子浓度、骨形态发生蛋白4、Runt相关转录因子2均降低,骨桥蛋白、肿瘤坏死因子α显著升高(P <0.01);Ad-shBak1+shBcl2组的细胞活性、碱性磷酸酶活性稍升高,钙离子浓度稍降低,各骨调节蛋白水平均升高,但差异不明显(P> 0.05);(2)与Ad-sh Bcl2组比较,Ad-shBak1组与Ad-shBak1+shBcl2组细胞活性、碱性磷酸酶活性升高,钙离子浓度显著降低,除肿瘤坏死因子α水平显著降低外,其余骨调节蛋白水平显著升高(P <0.01或P <0.05);(3)结果提示,过表达ERRα可提高重组腺病毒Bak1转染后的MG63细胞增殖和碱性磷酸酶活性,降低钙离子浓度,且对骨调节蛋白有一定影响作用。
- 黄红黄佳纯黄宏兴王吉利刘少津汪悦东
- 关键词：BCL2腺病毒凋亡蛋白腺病毒科
