国家自然科学基金(30760275)
- 作品数：8 被引量：23H指数：3
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- 鞘氨醇激酶-1在结肠癌中的作用研究进展被引量：2
- 2009年
- 鞘氨醇激酶(Spk)是一种新近发现的脂类激酶。近年来的研究逐渐阐明了Spk结构特征及其功能,并发现Spk1对肿瘤尤其是结肠肿瘤的发生发展具有促进作用。抑制Spk1不但能促进肿瘤细胞的凋亡,还能提高结肠肿瘤对化疗药物的敏感性。
- 覃蒙斌黄杰安
- 关键词：鞘氨醇激酶-1结肠癌肿瘤发生化疗
- 鞘氨醇激酶在胃癌中的研究进展被引量：1
- 2013年
- 鞘氨醇激酶(SphK)是鞘脂代谢酶,已发现有SphKl和SphK2两种异构体。SphK1在包括胃癌在内的多肿瘤中表达增加,能促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移,并参与了肿瘤血管的形成,而且可能在肿瘤化疗耐药中起重要作用。目前,针对SphK2的研究结果虽不一致,但多偏向于SphK2促进肿瘤细胞增殖并抑制凋亡,也参与肿瘤的发生和发展。调控SphK有望成为包括胃癌在内的肿瘤治疗的新靶点。
- 刘诗权黄杰安
- 关键词：鞘氨醇激酶肿瘤发生胃癌
- siRNA下调鞘氨醇激酶-1对结肠癌LOVO细胞凋亡和侵袭的影响及其机制的研究被引量：1
- 2011年
- 目的研究siRNA下调鞘氨醇激酶-1(Sphk1)的表达对结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡、侵袭以及ERK和p38通路的影响。方法采用siRNA抑制Sphk1的表达;采用MTT法测定细胞的增殖,流式细胞术分析细胞的凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭力的变化,Western杂交检测蛋白的表达;采用RT-PCR法检测细胞Sphk1 mRNA表达,ELISA法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂(uPA)的分泌。结果 Sphk1 siRNA显著抑制Sphk1 mRNA和蛋白表达,并可诱导细胞的凋亡,抑制细胞的增殖和侵袭。抑制Sphk1的表达可降低ERK和磷酸化ERK蛋白的表达,并促进p38和磷酸化p38蛋白的表达,同时可抑制细胞MMP-2、MMP-9和uPA的分泌。结论抑制Sphk1可能是通过抑制ERK并激活p38 MAPK通路,下调MMP-2、MMP-9和uPA的分泌,从而抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭并促进细胞的凋亡。
- 刘诗权钟月圆黄杰安覃蒙斌唐国都姜海行
- 关键词：结肠肿瘤鞘氨醇激酶-1细胞凋亡肿瘤侵润
- 鞘氨醇激酶1通过调控黏着斑激酶和黏附分子的表达促进结肠癌细胞的增殖和侵袭被引量：4
- 2013年
- 目的探讨鞘氨醇激酶1（SphKl）对人结肠癌LoVo细胞增殖、侵袭、迁移、黏着斑激酶（FAK）通路以及细胞间黏附分子1（ICAM-1）和血管细胞黏附分子1（VCAM-1）的影响。方法采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐（PMA）和N，N-二甲基鞘氨醇（DMS）诱导和抑制人结肠癌LoVo细胞SphKl的活性，放射自显影法检测SphKl的活性，四甲基偶氮唑蓝（M-TT）法检测细胞的增殖活性，Boyden小室观察细胞迁移和侵袭能力的变化，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定可溶性ICAM-1（sICAM-1）和可溶性VCAM-1（sVCAM-1）浓度，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测FAK、ICAM-1和VCAM-1mRNA的表达，Westernblot法检测FAK和磷酸化FAK（p-FAK）蛋白的表达。结果PMA和DMS能分别显著地诱导和抑制SphKl活性，PMA呈时间一剂量依赖性促进细胞的增殖，而DMS则呈时间一剂量依赖性抑制细胞的增殖。PMA和DMS处理24h后，对照组、PMA组和DMS组迁移细胞数分别为（75．48±6．12）个、（143．36±8．73）个和（38．574-3．24）个，侵袭细胞数分别为（64．19±5．36）个、（118．46±6．25）个和（32．48±4．27）个，与对照组比较，PMA组迁移和侵袭细胞数明显增多，DMS组则显著减少（均P〈0．01）。对照组、PMA组和DMS组的FAKmRNA相对表达水平分别为0．42±0．04、0．82±0．06和0．23±0．02，ICAM．1mRNA的相对表达水平分别为0．49±0．06、0．74±0．05和0．26±0．03，VCAM-1mRNA的相对表达水平分别为0．69±0．04、0．89±0．09和0．37±0．04，与对照组比较，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。对照组、PMA组和DMS组的FAK蛋白相对表达水平分别为0．34±0．04、0．52±0．06和0．20±0．03，p-FAK蛋白相对表达水平分别为0．37±0．05、0．51±0．06和0．09±0．02，与对照组比较，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。sICAM-1和sVCAM-1浓度随着SphKl活性的增强而升高，随着SphKl活�
- 刘诗权苏颖洁黄杰安覃蒙斌唐国都
- 关键词：结肠肿瘤黏着斑激酶细胞黏附分子细胞侵袭
- 鞘氨醇激酶1调控p38和c—Jun氨基末端激酶通路影响结肠癌HT-29细胞的凋亡迁移与侵袭被引量：6
- 2011年
- 目的探讨鞘氨醇激酶1（SphK1）对结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐（PMA）和N，N-二甲基鞘氨醇（DMS）诱导和抑制人结肠癌HT-29细胞SphK1的活化和表达，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖，流式细胞术分析细胞凋亡，γ-^32P—ATP掺入法检测SphK1的活性，Western blot检测蛋白的表达，Transwell小室模型观察细胞迁移和侵袭能力的变化。结果PMA和DMS能分别诱导和抑制SphK1活性和表达，在24h内呈一定的时间依赖性。PMA能抑制细胞的凋亡，100nmol／LPMA作用0、6、12、24h后，细胞凋亡率分别为（9．35±0．84）％、（7．61±0．48）％、（5．53±0．76）％和（0．56±0．33）％。DMS能显著抑制细胞的增殖，诱导细胞的凋亡，50μmol／LDMS作用0、6、12、24h后，细胞凋亡率分别为（9．18±0．94）％、（12．06±1．41）％、（19．80±2．36）％和（31．85±3．60）％。对照组、PMA组和DMS组的迁移细胞数分别为68．75±6．15、109．33±11．63和10．83±2．48，侵袭细胞数分别为55．42±4．50、90．58±7．06和9．58±2．39，与对照组比较，PMA组迁移和侵袭细胞数明显增多，而DMS组则显著减少。对照组、PMA组和DMS组的p38表达强度分别为0．20±0．03、0．08±0．02和0．31±0．03，磷酸化p38（p-p38）表达强度分别为0．19±0．02、0．09±0．02和0．38±0．05，应激活化蛋白激酶／c-Jun氨基末端激酶（SAPK／JNK）的表达强度分别为0．26±0．03、0．12±0．03和0．43±0．06，PMA显著抑制p38、p-p38和SAPK／JNK蛋白的表达，而DMS则促进p38、p-p38和SAPK／JNK蛋白的表达。结论SphK1可促进结肠癌HT-29细胞的增殖、迁移和侵袭能力，并抑制细胞的凋亡，其机制可能是通过抑制p38和SAPK／JNK通路而发挥作用。
- 刘诗权覃蒙斌黄杰安钟月圆唐国都姜海行
- 关键词：结肠肿瘤鞘氨醇激酶-1迁移
- 鞘氨醇激酶-1调控ERK和NF-κB通路促进HT-29细胞的增殖和侵袭被引量：3
- 2011年
- 目的探讨鞘氨醇激酶-1(Sphk1)对结肠癌HT-29细胞的增殖、凋亡和侵袭转移的影响及其作用机制。方法采用(12-)十四酸佛波酯(-13-)乙酸盐(PMA)诱导人结肠癌HT-29细胞Sphk1的活化和表达,N,N-二甲基鞘氨醇(DMS)抑制Sphk1的活化和表达;采用MTT法测定细胞的增殖,流式细胞术分析细胞的凋亡,γ-32P-ATP掺入法检测Sphk1的活性,Western杂交检测蛋白的表达,Transwell小室模型观察细胞迁移和侵袭能力的变化,ELISA法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂(uPA)的分泌。结果 PMA和DMS能分别有效地诱导和抑制HT-29细胞Sphk1活性和蛋白的表达;同时,PMA能促进细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞的凋亡;DMS则抑制细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞的凋亡。诱导Sphk1的活化以及表达可促进细胞ERK、p-ERK和NF-κBp65的蛋白表达以及MMP-2、MMP-9和uPA的分泌,而抑制Sphk1则抑制ERK、p-ERK和NF-κBp65的蛋白表达以及MMP-2、MMP-9和uPA的分泌。结论 Sphk1可能是通过激活ERK和NF-κB通路,上调MMP-2、MMP-9和uPA的分泌,从而促进结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞的凋亡。
- 刘诗权覃蒙斌钟月圆黄杰安唐国都姜海行
- 关键词：鞘氨醇激酶-1结肠癌细胞凋亡
- 鞘氨醇激酶-1激活ERK通路介导人结肠癌细胞株LoVo侵袭与迁移的实验被引量：1
- 2011年
- 目的研究Sphk1对人结肠癌LoVo细胞侵袭与迁移能力的影响并探讨其作用机制。方法将人结肠癌LoVo细胞分成Sphk1激活组,Sphk1抑制组,空白对照组。以Phorbol 12-myristate 13-ace-tate(PMA)为Sphk1激活剂(终浓度为100 nM),N,N-dimethyl-D-eryt-hro-sphingosine(DMS)为Sphk1抑制剂(终浓度为50μM),NaCl(终浓度为0.9%)为空白试剂处理LoVo细胞24 h后,用Transwell Boyden小室模型测定LoVo细胞的相对侵袭率与迁移率;用Western blot方法测定细胞Sphk1、ERK1/2与p-ERK1/2蛋白水平的变化;用ELISA方法检测细胞培养上清中MMP-2、MMP-9及uPA的蛋白含量;用半定量RT-PCR检测细胞中MMP-2、MMP-9和uPA的mRNA水平。结果 Sphk1激活剂可促进LoVo细胞侵袭与迁移,同时明显增强LoVo细胞中Sphk1、ERK1/2及p-ERK1/2的蛋白表达,并促进MMP-2、MMP-9及uPA的mRNA表达与蛋白分泌。Sphk1抑制剂则抑制LoVo细胞侵袭与迁移,同时抑制Sphk1、ERK1/2与p-ERK1/2的蛋白表达,并抑制MMP-2、MMP-9及uPA的mRNA表达与蛋白分泌。结论 Sphk1可促进人结肠癌细胞株LoVo细胞的侵袭与迁移,其机制可能与激活ERK1/2信号通路从而促进MMP-2、MMP-9及uPA mRNA表达与蛋白分泌有关。
- 钟月圆刘诗权黄杰安覃蒙斌金卉
- 关键词：鞘氨醇激酶-1人结肠癌细胞迁移
- 鞘氨醇激酶1和核因子κB p65在结肠癌中的表达及其临床意义被引量：8
- 2012年
- 目的探讨鞘氨醇激酶1（SphKl）和NF-κB在结肠癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化sP法、Western blot法和半定量RT-PCR法，检测66例结肠癌、癌旁及正常结肠黏膜组织中SpbKl和NF-κB的蛋白及mRNA表达。结果RT-PCR结果显示，66例结肠癌组织中SphKl和NF-κBmRNA阳性表达率分别为84．85％（56／66）和74．24％（49／66），Westernblot结果显示其SphKl和NF-κB蛋白阳性表达率分别为78．79％（52／66）和69．70％（46／66），均高于癌旁[mRNA：63．64％（42／66），48．49％（32／66）；蛋白：57．58％（38／66），45．45％（30／66）]和正常黏膜组织[mRNA：42．42％（28／66），25．76％（17／66）；蛋白：36．36％（24／66），24．24％（16／66）]，P值均〈0．05。结肠癌组织中SphKl和NF-κB的mRNA及蛋白的相对表达水平均高于癌旁及正常结肠黏膜组织（mRNA：0．554-0．06比0．354-0．05比0．25±0．05，0．75±0．06比0．434-0．05比0．304-0．04：蛋白：0．774-0．05比0．384-0．06比0．124-0．03，0．454-0．08比0．23±0．05比0．134-0．03；p值均〈0．05）。SphKl和NF-κB表达之间存在明显相关性（r=0．459，P=0．036）。免疫组化结果与前述较为一致。SphKl和NF-κB在癌组织中的高表达水平与肿瘤浸润程度、有无远处转移、淋巴结转移、临床分期有关（P值均〈0．05）。SphKl的高表达水平还与组织分化程度有关（P〈0．05）。结论SphKl和NF-κB可能与结肠癌的发生、发展密切相关，并可能在结肠癌的浸润和转移中起重要作用。
- 苏颖洁黄杰安刘诗权黄娟秀钟月圆唐国都姜海行
- 关键词：结肠肿瘤肿瘤转移NF-ΚB
