陕西省科技攻关计划(2012K16-08-05)
- 作品数：3 被引量：16H指数：3
- 相关作者：陈景荷何丽洁王汉民梁维张雅静更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学西安市第一医院更多>>
- 发文基金：陕西省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- miR-143-3p在人腹膜间皮细胞转分化过程中的作用及机制被引量：9
- 2015年
- 目的探讨miR-143-3p在高糖刺激的人腹膜间皮细胞(HPMC)转分化中的作用及相关机制。方法将永生化的HPMC给予50mmol/L高糖刺激72h后,反转录PCR及Westernblot法检测miR-143-3p、血清反应因子(SRF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)及Snail的mRNA和蛋白表达变化;利用miR-143-3p的模拟物、模拟物阴性对照、抑制剂及抑制剂阴性对照;pcDNA3.1空载体与pcDNA3.1-SRF质粒;SRF-siRNA和阴性对照分别转染高糖刺激72h后的HPMC,反转录PCR及Westernblot法检测miR-143-3p、SRF、α-SMA、E-cadherin及Snail的mRNA和蛋白表达水平。结果反转录PCR及Westernblot法检测结果显示,高糖刺激HPMC72h后,miR-143-3p、SRF、α-SMA及Snail表达增加,而E-cadherin表达下降;上调miR-143-3p的表达后,SRF、α-SMA及Snail表达增加,而E-cadherin表达降低。下调miR-143-3p的表达后,SRF、α-SMA及Snail表达减少,而E-cadherin表达增加。利用pcDNA3.1-SRF质粒上调SRF表达,则miR-143-3p、α-SMA及Snail表达增加,而E-cadherin表达下调;SRF-siRNA沉默SRF后,miR-143-3p、α-SMA及Snail表达下调,而E-cadherin表达增加。结论SRF/miR-143-3p信号通路轴参与了高糖刺激所引起的人腹膜间皮细胞的转分化过程,其机制可能是通过SRF上调miR-143-3p的表达,间接参与人腹膜间皮细胞的转分化。
- 车明文胡晋平唐亚为陈景荷张雅静何丽洁王汉民
- 关键词：MIR-143
- 血清反应因子促进人腹膜间皮细胞的转分化被引量：3
- 2014年
- 目的探讨血清反应因子(SRF)在人腹膜间皮细胞(HPMC)转分化中的作用。方法腹膜间皮细胞由腹膜透析(PD)患者透出液离心后进行培养,观察不同透龄患者的原代腹膜间皮细胞改变,并用免疫荧光细胞化学方法检测SRF及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Snail、E-钙黏素(E-cadherin)的表达。细胞经高糖刺激发生转分化后,将SRF siRNA转染至细胞中使SRF下调,用免疫荧光细胞化学技术及Western blot法检测E-cadherin和α-SMA、Snail的表达。采用染色体免疫共沉淀(ChIP)及报告基因方法检测SRF与Snail的结合情况。结果无菌收集50例PD患者透出液,原代培养HPMC,随着透析时间的延长,细胞从铺路石样逐渐转变为成纤维细胞样;SRF表达显著增强时,间质标志分子α-SMA的表达增强,而上皮标志分子E-cadherin表达减弱。永生化的HPMC经高糖刺激72 h使其发生转分化后,用小干扰RNA使SRF沉默。与对照组相比,免疫荧光细胞化学染色显示SRF下调后,α-SMA、Snail的表达明显减弱,而E-cadherin表达明显增强;Western blot结果显示SRF的表达水平降低时,E-cadherin表达升高,而α-SMA、Snail的表达明显减少。ChIP结果提示,SRF可与Snail启动子区2个结合位点SRE1和SRE2结合,报告基因结果显示,SRF主要与SRE2位点结合并启动Snail的表达。结论 SRF在已发生间充质转分化的HPMC或腹膜纤维化时高表达,可能通过启动Snail表达来促进HPMC转分化。
- 梁维娄未娟车明文陈景荷何丽洁王汉民
- 关键词：上皮间质转分化E-钙黏素Α平滑肌肌动蛋白
- 转录因子Twist促进腹膜透析患者腹膜纤维化的作用机制研究被引量：9
- 2013年
- 目的探讨转录因子Twist对腹膜透析患者腹透流出液人腹膜间皮细胞(HPMCs)的作用及相关机制。方法将腹膜透析患者透出液离心后进行HPMCs培养,检测Twist、E-cadherin、α-SMA、Bmi-1的蛋白及免疫荧光表达。分别采用上调质粒pcDNA3.1-Twist和空载体pcDNA3.1转染HPMCs,检测Twist、E-cadherin、α-SMA以及Bmi-1的蛋白及免疫荧光表达。分别采用Twist的siRNA质粒和空载体pSlience转染转分化的HPMCs,检测Twist、E-cadherin、α-SMA以及Bmi-1的蛋白及免疫荧光表达。采用Bmi-1的siRNA质粒转染转分化的HPMCs,检测E-cadherin、α-SMA以及Bmi-1的蛋白及免疫荧光表达。结果免疫荧光及Western blotting检测结果显示,随着透龄增加,E-cadherin表达降低,Twist、α-SMA及Bmi-1表达增加(P<0.05)。与空载体组相比,HPMCs过表达Twist后,E-cadherin表达减弱,Twist、α-SMA及Bmi-1表达增加(P<0.05)。用小干扰RNA使Twist沉默后,E-cadherin表达增加,Twist、α-SMA及Bmi-1表达减弱(P<0.05)。用小干扰RNA使Bmi-1沉默后,E-cadherin表达增加,α-SMA、Bmi-1表达减弱(P<0.05)。结论 Twist参与了腹膜纤维化的发生发展过程,其作用部分是通过Bmi-1促进HPMCs的转分化实现的。
- 贾真姬丽华陈景荷梁维车明文何丽洁孙世仁王汉民
- 关键词：腹膜纤维化TWIST转录因子BMI-1钙黏着糖蛋白类肌动蛋白类
