国家自然科学基金(30570567)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 相关作者：段德义赵春礼梁彩霞徐群渊徐云智更多>>
- 相关机构：首都医科大学首都医科大学附属北京天坛医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人类白细胞抗原A表达沉默对大鼠脑内人细胞移植排斥反应的调节被引量：1
- 2008年
- 背景:移植物主要组织相容性抗原复合物在移植排斥反应中起关键作用。用慢病毒介导的人类白细胞抗原RNA干扰技术可以降低T淋巴细胞的细胞毒作用和抗体介导的溶细胞作用,但尚未见相关体内研究报道。目的:拟用携带人类白细胞抗原A小分子干扰RNA序列的慢病毒感染人胚肺成纤维细胞,再将其移植到帕金森大鼠纹状体,观察人类白细胞抗原A表达沉默对移植排斥反应的调节。设计、时间及地点:细胞基因工程体内实验,于2005-09/2008-01在首都医科大学神经科学研究所完成。材料:清洁级12周龄雌性SD大鼠33只,用于建立帕金森动物模型。原代培养的人胚肺成纤维细胞取材于12周流产人胚胎,由北京京北医院提供。293T为贴壁依赖型成上皮样细胞。慢病毒载体系统由pSicoR,pCMV-VSV-G和psPAX2三质粒组成,为美国Addgene公司产品。携带HLA-A2 cDNA的pcDNA I/Amp-HLA质粒由比利时Ludwig肿瘤研究所Pierre van Bruggen教授惠赠。方法:以携带HLA-A2 cDNA的pcDNA I/Amp-HLA质粒为模板PCR扩增HLA-A2 cDNA编码区序列,构建人类白细胞抗原A融合蛋白表达载体pEGFP-Flag-HLA,转染293T细胞。用HLA-A2编码区序列设计小分子干扰RNA4个待选靶点序列,分别起始于编码区的第257,350,833,251位碱基,构建表达小分子干扰RNA慢病毒载体。用带有Flag标签的人类白细胞抗原AcDNA表达载体转染293T细胞后,再进行不同靶点病毒直接感染。33只帕金森模型大鼠随机分为2组,实验组大鼠纹状体植入人类白细胞抗原A小分子干扰RNA病毒感染的人胚肺成纤维细胞,对照组植入带有小分子干扰RNA对照序列和绿色荧光蛋白病毒感染的人胚肺成纤维细胞。主要观察指标:免疫组织化学染色检测脑内移植物人类白细胞抗原A、CD4和CD8的表达,用抗人细胞核的阳性表达评价移植细胞的存活情况。结果:与对照组比较,实验组移植后4d、2周时人类白细胞抗原A阳性
- 徐云智梁彩霞赵春礼郑德宇段德义
- 关键词：RNA干扰移植排斥
- 胰岛素样生长因子结合蛋白4基因敲除小鼠的建立和鉴定被引量：1
- 2020年
- [目的]用CRISPR/Cas9技术构建胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)基因敲除(knock-out,K0)小鼠,以研究IGFBP-4对脑发育的影响。[方法]将IGFBP-4引导RNA和Cas9mRNA显微注射于小鼠受精卵,繁育小鼠并观察体重和脑重改变。PCR和RT-PCR鉴定DNA和mRNA突变,IsotropicFractionator测脑细胞总数和神经元数量,WestermBlot观察NeuN表达,转棒实验测试动物行为学;[结果]K0造成了4种DNA缺失和插人突变,选择缺失GGGT致移码突变的动物进行繁育。与野生型小鼠相比,3月龄KO小鼠体重减轻了10.8%(P<0.05),整脑、皮层和小脑重量分别减轻了7.2%.6.9%和10.3%(P<0.05),小脑神经元比例和NeuN表达水平分别降低了14.3%和15.3%(P<0.05),Rotarod运动能力有所降低。[结论]用CRISPR/Cas9成功制备了IGFBP-4KO小鼠,动物体重和部分脑区重量和神经元数量受到了影响。
- 王涵菲勾荣彬张贺孙晓红徐群渊段德义
- 关键词：基因敲除小鼠神经发育
- 药物运输泵与难治性癫痫被引量：1
- 2006年
- 癫痫患者耐药机制各不相同,其中运输泵机制能限制抗癫痫药物到达癫痫发作部位而引起耐药。运输泵中最典型的是P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp),主要表达在一些有分泌功能的器官和血脑屏障中,能限制亲脂性药物进入脑内。抗癫痫药物在理论上似乎可以是P-gp的底物,过表达的P-gp降低了这些药物在癫痫灶内的浓度从而引起耐药。这一观点为难治性癫痫的治疗带来了新的希望,如运用一些运输泵的抑制剂来提高脑内抗癫痫药物浓度。
- 吴春春段德义丁成云徐群渊
- 关键词：难治性癫痫P-糖蛋白抗惊厥药
- HLAA表达沉默和酪氨酸羟化酶过表达的人成纤维细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠模型被引量：1
- 2009年
- 目的观察人白细胞抗原A(HLA A)敲减和酪氨酸羟化酶(TH)过表达的人胚肺成纤维细胞(HELFs)于脑内移植后帕金森病(PD)大鼠的旋转行为和脑内炎性反应。方法用TH反转录病毒和携带HLA A干扰序列的慢病毒(表达绿色荧光蛋白GFP)感染细胞后移植于PD大鼠模型纹状体。移植后检测大鼠旋转行为,免疫组化染色观察TH、OX42、OX6和GFAP表达,GFP观察移植物存活。同时移植HELFs以及TH转导的HELFs和大鼠肺成纤维细胞作对照。结果移植后GFP荧光细胞数量逐渐减少,HLA A敲减组细胞的减少相对较轻,但对大鼠旋转行为的改善不明显;OX42阳性小胶质细胞改变不明显,但OX6表达逐渐增加,而GFAP阳性细胞激活逐渐下降但仍强于移植对侧。结论HLA A表达沉默细胞移植对大鼠运动症状改善不明显,细胞移植能激活小胶质细胞和星形胶质细胞。
- 梁彩霞徐云智赵春礼郑德宇段德义
- 关键词：帕金森病酪氨酸羟化酶异种移植
