国家科技重大专项(2009ZX10607)
- 作品数:3 被引量:6H指数:2
- 相关作者:姚昕毛群颖梁争论张向颖张贺秋更多>>
- 相关机构:中国药品生物制品检定所军事医学科学院第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金:国家科技重大专项公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 肠道病毒71型外壳蛋白VP1全长在大肠杆菌中的高效表达及初步活性测定被引量:4
- 2010年
- 目的:重组表达肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白VP1全长,用于研制血清学检测试剂和疫苗研发。方法:在获得EV71全长基因并测序正确的基础上,将外壳蛋白VP1全长基因克隆到表达载体pET28a(+)上,构建重组表达质粒pET28a(+)/VP1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用双抗原夹心检测技术评价重组抗原与27份EV71抗体阳性血清和18份阴性血清的反应情况。结果:重组EV71-VP1蛋白在大肠杆菌中诱导6 h后可获得高效表达,能与27份EV71抗体阳性血清中的21份发生阳性反应,EV71双抗原夹心检测与中和血清测试结果具有很好的一致性(P<0.05)。结论:实现了肠道病毒71型外壳蛋白VP1的高效表达,为肠道病毒71型诊断试剂和疫苗的研究奠定了基础。
- 张向颖修冰水毛群颖姚昕梁争论张贺秋
- 关键词:肠道病毒71型克隆表达
- 抗preS1分子高效单克隆抗体的制备及其在血清LHBs检测中的应用被引量:2
- 2011年
- 目的制备可用于血清LHBs检测的针对preS1高效单克隆抗体并进行初步临床应用研究。方法对乙肝preS1区段基因(B基因型,adr血清亚型)全长序列(1~119 aa)进行密码子偏嗜性改造后,克隆入质粒pET32a构建原核表达重组质粒并转化入大肠杆菌BL21(DE3),采用离子交换、HIS亲和层析柱以及肠激酶(EK酶)酶切等方法建立preS1重组蛋白的纯化工艺,制备筛选单克隆抗体的筛选原;综合应用多种生物信息学分析软件预测LHBs preS1区段B细胞表位肽preS1(36~58 aa),合成该肽段后与BSA交联,通过新型免疫程序制备单克隆抗体;建立以抗preS1高效单克隆抗体为基础的ELISA方法,并对临床血清LHBs进行检测分析。结果获得了高纯度的重组preS1蛋白,HPLC分析其纯度为98%,通过新型免疫程序制备的抗preS1单克隆抗体1-E6(IgG1)特异性好,对preS1(LHBs)的检出率(83.3%)高于其他同类抗体(P〈0.01)。结论获得高效特异的抗preS1单克隆抗体1-E6以及高纯度重组preS1蛋白免疫检测标准品。
- 李新军张竹君易维京陈安李淑慧赵忠颢刘明栋范毓东胡川闽
- 关键词:PRES1单克隆抗体ELISA
- 基于狂犬病病毒载体的基因工程疫苗研究进展
- 2010年
- 对HIV-1和HCV等重大传染性疾病传统疫苗研制的失败,让科学家们把目光转向开发新型疫苗研制策略。其中之一就是用减毒的重组病毒载体表达外源抗原来免疫,可以保护个体免受相应病原体的暴露威胁。一种新的手段就是从cDNA克隆拯救单股负链RNA病毒,这一技术为弹状病毒科成员用于疫苗载体和生物医学工具打开了一扇窗。
- 杜加亮唐青
- 关键词:基因工程疫苗病毒载体狂犬病重大传染性疾病CDNA克隆HIV-1
- 基于化学发光肠道病毒71型IgM抗体检测试剂研制及初步应用
- 目的在肠道病毒71型(EV71)重组外壳蛋白VP1的基础上建立以化学发光为基础的IgM抗体检测技术,并与普通TMB显色ELISA法比较,评价其临床应用前景。方法采用抗IgM单抗及辣根酶标记的重组VP1抗原,在此基础上建立...
- 陈堃宋晓国张向颖杨锡琴王国华冯晓燕何竞张贺秋修冰水
- 关键词:肠道病毒71型VP1基因化学发光
- 文献传递