四川省教育厅自然科学科研项目(2005A181)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 假单胞菌褐藻胶裂合酶活性片段的基因克隆及重组表达条件的优化
- 2008年
- 为分析假单胞菌(Pseudomonas)膜周质中褐藻胶裂合酶(alginate lyase,AlgL)的最小活性单元,进行了活性片段的初步研究.用简并引物克隆MY01菌株中AlgL基因的片段,用特异引物扩增目的序列并克隆入pBAD gⅢ/A载体,转化大肠杆菌并筛选阳性克隆.进行L-阿拉伯糖诱导表达条件的优化,超声破碎重组菌体并分离水溶性组分作为粗酶,以褐藻酸钠为底物进行酶解反应,在235 nm测定产物的吸收值.结果该基因片段300 bp大小,GenBank收录号为AY736133,所编码的氨基酸序列中含有基序"NNHSYW",且在系统发育树中与假单胞菌的AlgL聚类.在优化条件下获得粗酶,酶解反应产物在235 nm有显著吸收,表明重组融合蛋白具有褐藻胶裂合酶活性.褐藻胶裂合酶的研究较多,但其活性片段的重组表达研究少见报导.
- 王怀玉古静燕李天东韩文君罗英阮期平
- 关键词：假单胞菌基序基因克隆
