上海市科学技术委员会资助项目(11140902902)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：杨燕曹国番杨懿铭郝俊杨洁更多>>
- 相关机构：华东师范大学复旦大学上海市血液中心更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 同种异基因抗原特异性调节性T细胞的体外扩增被引量：1
- 2012年
- 目的建立用人B淋巴细胞体外获得大量的同种异基因抗原特异性调节性T(Treg)细胞的方法,以此检测扩增细胞的表型及其免疫无能性和免疫抑制性。方法第1轮扩增将免疫磁珠分选的人CD4+CD25+T细胞和人B淋巴细胞按1∶4体外混合培养,并加入外源白介素-2(IL-2)和抗-CD28;将第1轮扩增得到的Treg细胞用抗-CD3/CD28包被的免疫磁珠和IL-2刺激,做第2轮扩增以获得更多数量的抗原特异性Treg细胞,分为添加和或未添加免疫抑制剂雷帕霉素(RAPA)2组(n=3)。结果经过2轮的扩增后,在第2轮扩增中未添加RAPA组扩增1×103倍,纯度>80%;添加RAPA组扩增0.8×103倍,纯度>90%。添加RAPA组得到的Treg细胞的Foxp3、CT-LA4、CD39表达水平高于未添加RAPA组,但是HLA-DR变化不大;未添加RAPA组扩增得到的Treg细胞分泌低水平的IL-2、IL-17、IL-4和IFN-γ,而添加RAPA组得到的Treg细胞几乎不分泌上述各种细胞因子,前者表现出部分免疫反应无能性,后者表现出完全的免疫反应无能性,两者都表现出免疫抑制性功能特征。人B淋巴细胞扩增得到的抗原特异性Treg细胞能够极大地抑制同源抗原引起的免疫反应,而对多克隆刺激的免疫反应抑制能力较弱。结论用人B细胞体外扩增抗原特异性Treg细胞,再通过抗-CD3/CD28包被的免疫磁珠进一步刺激可以体外获得大量的抗原特异性的Treg细胞,加入RAPA后可有效地提高Treg细胞的纯度和免疫抑制力且呈现抗原特异性。
- 曹国番郝俊李振华杨燕杨懿铭杨洁任亚娜谢如峰范华骅钱开诚
- 关键词：TREG细胞抗原特异性体外扩增免疫磁珠
- 雷帕霉素对人CD4^+CD25^+调节性T细胞体外扩增的影响被引量：2
- 2012年
- 探讨有效的体外扩增人CD4^+CD25^+调节性T细胞(Treg)的方法以及雷帕霉素(rapamycin,RAPA)对人CD4^+CD25^+Treg细胞体外扩增的影响。采用免疫磁珠分离人外周血的CD4^+CD25^+Treg,并将实验分为3组:第1组在CD4^+CD25^+Treg培养体系中加入200 U/ml IL-2和包被CD3/CD28单克隆抗体的磁珠;第2组培养体系中除加入100 nmol/LRAPA以外,其余与第1组相同;第3组是CD4^+CD25^+Treg培养第12天后,将细胞进一步分选获取CD4^+CD25^+CD127^- Treg再继续培养,培养体系与第2组相同。实验结果显示,加RAPA培养的CD4^+CD25^+Treg细胞扩增效率比不加RAPA的低,但细胞的纯度明显提高(92%vs 65%)。而加RAPA培养的第2、3组CD4^+CD25^+Treg细胞在纯度上没有明显的差异。加RAPA培养的CD4^+CD25^+Treg细胞扩增后保持其无能状态。体外抑制实验显示体外扩增的CD4^+CD25^+Treg细胞对CD4^+效应T细胞增殖均有明显的抑制作用,而且加RAPA扩增的Treg细胞表现出更强的抑制功能。另外,与第1组体外扩增的Treg细胞相比,加RAPA扩增的Treg细胞表达低水平的IL-2和IFN-γ。实验证明雷帕霉素抑制了CD4^+ CD25^+Treg细胞中混杂的CD4^+效应T细胞的扩增,使用雷帕霉素可以提高体外扩增CD4^+CD25^+Treg细胞的纯度及其免疫抑制功能。
- 郝俊曹国番杨洁杨懿铭李振华杨燕范华骅
- 关键词：体外扩增雷帕霉素
