国家自然科学基金(30400472)
- 作品数：8 被引量：49H指数：4
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- 结缔组织生长因子影响体外培养瘢痕成纤维细胞ERK／MAPK信号通路活化及增殖的研究
- 2009年
- 目的探讨结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）诱导增生性瘢痕（hypertrophic scar，HS）成纤维细胞增殖的信号转导通路。方法采用。H-胸腺嘧啶核苷（^3H—TdR）掺入法观察不同浓度CTGF促HS成纤维细胞增殖的效应，以Western印迹法检测CTGF刺激HS成纤维细胞0、5、10、15、30、60min后，磷酸化及非磷酸化细胞外信号调节激酶1／2（extracellular-signal regulated kinase，ERK1／2）的表达，以两者的比值AI衡量信号通路活化程度；应用特异性阻断剂PD98059阻断ERK通路，MTT法检测CTGF诱导细胞增殖的变化。结果CTGF在一定浓度范围内呈浓度依赖性促HS成纤维细胞增殖，ERK1／2在无CTGF刺激时AI为0．0131±0．0036，CTGF刺激HS成纤维细胞5、10、15、30、60min后，AI值分别为0．0221±0．0033，0．1310±0．0361，0．2090±0．0201，0．1710±0．0379，0．0413±0．0036，在15min达高峰；采用PD98059选择性阻断ERK1／2通路后（A=0．420±0．046）与CTGF刺激组比较（A=0．660±0．035），细胞增殖显著受到抑制（P〈0．01）。结论ERK1／2是CTGF诱导HS成纤维细胞增殖的主要活化的信号通路。
- 戴霞李世荣李喆陶灵刘剑毅
- 关键词：结缔组织生长因子增生性瘢痕成纤维细胞细胞外信号调节激酶信号通路
- PI3K/PKB信号通路参与结缔组织生长因子促人增生性瘢痕纤维化被引量：4
- 2008年
- 目的探讨结缔组织生长因子对人增生性瘢痕成纤维细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B的激活作用。方法应用免疫印迹技术检测10ng/mL结缔组织生长因子作用于人增生性瘢痕成纤维细胞不同时间(0、5、15、30、60、120min)后蛋白激酶B的活化情况(以磷酸化蛋白激酶B和总蛋白激酶B比值表示),以及用同法检测磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002对结缔组织生长因子活化蛋白激酶B的作用。结果10ng/mL结缔组织生长因子作用于人增生性瘢痕成纤维细胞15min时,蛋白激酶B的活化水平(0.614±0.015)已明显高于对照组(0.308±0.021,P<0.05),30min时最明显(0.724±0.017,P<0.01),而且持续至少达120min,与对照组相比较,差异有统计学意义。10μmol/L LY294002作用人增生性瘢痕成纤维细胞后蛋白激酶B的活化水平下降(0.135±0.025),同对照组(0.422±0.015)相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论结缔组织生长因子可激活人增生性瘢痕成纤维细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路,LY294002可抑制结缔组织生长因子对此通路的激活。
- 刘剑毅李世荣
- 关键词：结缔组织生长因子增生性瘢痕磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B
- 结缔组织生长因子介导转化生长因子β1促进瘢痕成纤维细胞转分化的研究被引量：8
- 2009年
- 目的了解结缔组织生长因子（CTGF）介导TGF-β1发挥促人增生性瘢痕Fb（HSFb）转分化的作用。方法体外培养人HSFb，取5份细胞标本分别加入不同浓度TGF-β1（0、2．5、5．0、7．5、10．0ng／mL），作用48h后待测。余下标本分为：空白对照组；CTGF刺激组，培养液中加入终浓度10．0ng／mL重组人CTGF；TGF-β1刺激组，培养液中加入终浓度10．0ng／mL重组人TGF-β1；CTGF反义寡脱氧核苷酸（ASODN）转染组，细胞转染CTGF ASODN后，加入培养液；CTGF ASODN转染＋TGF-β1刺激组，细胞转染CTGF ASODN后2h，加入含终浓度10．0ng／mL重组人TGF-β1的培养液。蛋白质印迹法分析不同浓度TGF-β1刺激对细胞CTGF表达的影响，比较各组α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达变化；流式细胞仪检测α-SMA阳性细胞百分率。结果TGF-β1浓度为10．0ng／mL时，CTGF的表达明显高于未受刺激的细胞（P〈0．05）。CTGF刺激组与TGF-β1刺激组α-SMA表达明显高于空白对照组（P〈0．01）。CTGFASODN转染组以及CTGFASODN转染＋TGF-β1刺激组α-SMA表达与空白对照组接近（P〉0．05）。上述各组细胞α-SMA阳性细胞百分率依次为（10．8±2．8）％、（29．1±4．0）％、（28．7±4．8）％、（10．7±2．3）％、（14．3±2．9）％，统计学分析结果类似于α-SMA表达。结论CTGF是TGF-β1发挥促人HSFb转分化的重要下游效应分子之一。
- 李喆李世荣刘剑毅戴霞陶灵
- 关键词：转化生长因子Β1成纤维细胞转分化结缔组织生长因子增生性瘢痕
- PI3K/AKT信号通路在CTGF促人增生性瘢痕成纤维细胞转分化中的作用被引量：10
- 2008年
- 目的:探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路是否介导结缔组织生长因子促人增生性瘢痕成纤维细胞转分化。方法:体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,实验分3组:①空白对照组;②结缔组织生长因子(10ng/ml)刺激组;③磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002(10μmol/L)预处理后结缔组织生长因子刺激组。应用免疫印迹技术检测48h后a-平滑肌肌动蛋白的表达,应用流式细胞术检测a-平滑肌肌动蛋白阳性细胞百分率。结果:和空白对照组相比,结缔组织生长因子刺激组细胞a-平滑肌肌动蛋白表达和阳性细胞百分率升高;经磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002预处理后,再以结缔组织生长因子刺激,细胞a-平滑肌肌动蛋白表达和阳性细胞百分率升高水平下降,经统计学分析,差别具有显著性(P<0.05)。结论:结缔组织生长因子能够促进人增生性瘢痕成纤维细胞转分化,磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路介导该效应,磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002可抑制此效应。
- 刘剑毅李世荣
- 关键词：增生性瘢痕成纤维细胞磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B转分化A-平滑肌肌动蛋白
- STAT1在结缔组织生长因子刺激人增生性瘢痕成纤维细胞增殖分化中的作用被引量：1
- 2009年
- 目的基于既往研究，验证信号转导和转录活化因子1（STAT1）是否参与结缔组织生长因子（CTGF）刺激人增生性瘢痕成纤维细胞增殖分化过程。方法取6例增生性瘢痕患者的手术切除组织，培养成纤维细胞。应用凝胶阻滞电泳（EMSA）方法测定不同浓度（0、5、7．5、10、15ng／m1）CTGF刺激45min和10ng／mlCTGF刺激不同时间（0、10、20、30、45、60、90、120min）对瘢痕成纤维细胞STAT1与DNA结合能力的影响。将瘢痕成纤维细胞分为CTGF刺激组、STAT1反义寡脱氧核苷酸（ASODN）转染组、STAT1 ASODN＋CTGF组和空白对照组，用噻唑盐（MTT）法测定各组细胞培养1、2、3d的增殖活性，RT-PCR测定α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA表达以反映瘢痕成纤维细胞向肌成纤维细胞分化活性。结果瘢痕成纤维细胞中STAT1与DNA的结合活性随CTGF浓度而增强，当CTGF浓度为10ng／ml时达峰值；10ng／ml的CTGF刺激45～60min达峰值。MTT法检测显示CTGF刺激组培养1—3d增殖活性明显均高于空白对照组（均P〈0．05），而STAT1 ASODN转染组和STAT1 ASODN＋CTGF组均明显低于空白对照组和CTGF刺激组（均P〈0．05）。RT—PCR检测结果显示，CTGF刺激组、STAT1 ASODN转染组、STAT1 ASODN＋CTGF组和空白对照组瘢痕成纤维细胞向肌成纤维细胞分化活性分别为0．78±0．08、0．38±0．09、0．76±0．10和0．d0±0．12，STAT1 ASODN转染组和空白组均明显低于CTGF刺激组和STAT1 ASODN＋CTGF组（均P〈0．05）。结论STAT1 ASODN可明显抑制瘢痕成纤维细胞的增殖活性，并阻断CTGF对细胞增殖的刺激作用，提示STAT1参与CTGF调控人增生性瘢痕成纤维细胞增殖过程。
- 陶灵刘剑毅李世荣戴霞李喆
- 关键词：瘢痕结缔组织生长因子细胞分化
- 结缔组织生长因子通过PI3K/PKB抑制人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡被引量：3
- 2008年
- 目的探讨结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是否具有抑制人增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic scar fibroblast,HSF)凋亡的作用及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路(PI3K/PKB)是否介导该效应。方法体外培养HSF,实验分3组:空白对照组,②CTGF刺激组(10ng/ml),③PI3K抑制剂LY294002(10μmol/L)预处理后CTGF刺激组(LY294002组)。应用免疫印迹技术检测30min后蛋白激酶B的活化情况,应用流式细胞术检测细胞凋亡。结果和空白对照组相比,CTGF组细胞凋亡指数下降,蛋白激酶B的活化水平升高,具有统计学差异(P<0.05);LY294002组细胞凋亡指数上升,蛋白激酶B的活化水平没有升高,与CTGF组比较具有显著性差异(P<0.05)。结论CTGF能够抑制HSF凋亡,PI3K/PKB介导该效应。
- 刘剑毅李世荣
- 关键词：结缔组织生长因子增生性瘢痕成纤维细胞磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B
- CTGF刺激人增生性瘢痕成纤维细胞STATs蛋白活化的状况被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨CTGF刺激人增生性瘢痕成纤维细胞STATs蛋白活化的情况。方法:原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,将其分为:①对照组:人增生性瘢痕成纤维细胞组;②增生性瘢痕成纤维细胞外源性重组CTGF刺激组。取0min、5min、10min、20min、30min、45min、60min、90min八个时相点,分别采用MTT检测细胞增殖,western-blot检测各组之间a-平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin,a-SMA)的变化趋势以及各时相点STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5、STAT6蛋白活化(磷酸化)情况。结果:在确定成纤维细胞增殖以及a-SMA表达变化趋势以②-①组顺序递减的前提下(P<0.05),用western-blot观测两组STATs蛋白活化情况,发现:STAT1蛋白磷酸化水平以②-①组顺序递减(P<0.01);STAT2-6均有不同程度的磷酸化,但不以②-①组顺序递减。结论:STAT1可能在CTGF促进人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和分化过程中可能发挥着重要作用,以上研究结果为抑制瘢痕纤维化及挛缩提供了新的研究方向。
- 陶灵李世荣刘剑毅戴霞李喆覃霞毋巨龙
- 关键词：CTGF人增生性瘢痕成纤维细胞STATS
- 结缔组织生长因子体外促进人增生性瘢痕成纤维细胞转分化的研究被引量：21
- 2006年
- 目的研究结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)在人增生性瘢痕成纤维细胞转分化中的作用。方法培养人增生性瘢痕成纤维细胞,分别给予不同剂量CTGF刺激(10ng/ml),以及CTGFASODN转染,48h后用Westernblot方法比较各组间α平滑肌肌动蛋白(αsmoothmuscleactin,αSMA)的表达变化。结果刺激48h后,对照组表达少量αSMA蛋白;小剂量CTGF刺激组和大剂量CTGF刺激组作用48h后,αSMA表达量均显著增多,且成浓度依赖性变化(P<0.01);而CTGFASODN转染组αSMA蛋白表达与对照组比较明显减少(P<0.05)。结论CTGF在体外能促进人增生性瘢痕成纤维细胞向肌成纤维细胞(myofibroblast,MyoF)的转分化,阻断或者抑制其表达可能将更有效的治疗瘢痕挛缩。
- 李喆李世荣刘剑毅戴霞陈康陶灵
- 关键词：结缔组织生长因子增生性瘢痕成纤维细胞转分化
