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草酸钙尿石症患者肾组织γ-谷氨酰基羧化酶基因启动子序列分析及其活性研究: 2009年; 目的分析草酸钙尿石症患者肾组织γ-谷氨酰基羧化酶（GGCX）基因启动子序列多态性，并探讨该序列变化对启动子活性的影响。方法分别以42例草酸钙尿石症患者肾组织（尿石组）与31例非结石肾组织（肾肿瘤癌旁正常组织，对照组）基因组DNA为模板，PCR扩增GGCX基因5’-侧翼启动子区1329bp片段（-1270-＋58bp），电泳鉴定后，分别对两组PCR产物测序。筛选差异启动子序列克隆至萤光素酶报告基因载体pGL3-basic，转染293细胞，双萤光素酶检测启动子活性。结果与Ensembl正常序列比较，尿石组启动子片段测序共发现4处变异位点，-804bp处TT缺失（refsnp ID：rs11433794），-704bp处A→G、-511bp处A→G、-115bp处T→C。其中尿石组rsll43794SNP发生明显高于对照组（P〈0．05）。构建含rs11433794SNP位点的萤光素酶重组子pGL3-GGCX Promoter（804TT），与正常序列的重组子pGL3-GGCX Promoter比较，pGL3-GGCX Prorooter（804TT）转录活性明显下降（P〈0．01）。结论GGCX启动子区rs11433794SNP位点可能与草酸钙尿石症发生存在一定关系，该SNP位点可导致启动子转录活性下调，导致GGCX基因表达下降。; 杨俊刘继红王涛郭小林王军凯陈美元王少刚叶章群; 关键词：启动子萤光素酶

维生素K环氧化物还原酶亚单位1在草酸钙尿石症患者肾组织中的表达被引量：3: 2009年; 目的探讨草酸钙尿石症患者肾组织中维生素K环氧化物还原酶亚单位1（VKORC1）的表达及意义。方法收集肾脏皮质组织标本，其中草酸钙结石组12例，对照组23例（肾盂输尿管交界处狭窄和输尿管结核组6例，肾肿瘤皮质组17例，），应用免疫组织化学法确定VKORC1在组织中的定位，应用免疫印迹（Western blot）蛋白半定量法，对比各组VKORC1蛋白的表达水平。结果VKORC1定位于肾皮质。肾小管上皮细胞的胞质。结石组VKORC1蛋白的表达（122．33±11．34）明显低于对照组（262．16±7．33和286．71±9．82），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论草酸钙尿石症患者肾组织内VKOR表达降低在草酸钙尿结石形成中有重要作用。; 乔建坤刘继红王涛郭小林杨俊白剑王少刚叶章群; 关键词：草酸钙尿结石维生素K

草酸钙尿结石患者肾组织中维生素K依赖羧化酶的表达及其意义被引量：3: 2008年; 目的探讨草酸钙尿结石患者肾组织内维生素K依赖羧化酶（GGCX或VKDC）的表达及意义。方法收集肾脏皮质组织标本，其中草酸钙结石组12例，对照组23例（肾肿瘤皮质组17例，肾盂输尿管交界处狭窄和输尿管结核组6例），应用免疫组织化学法确定GGCX在组织中的定位，应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定各组间GGCX mRNA表达的差异，应用免疫印迹（Western blot）蛋白半定量法，对比各组GGCX蛋白的表达水平。结果GGCX定位于肾皮质肾小管上皮细胞的胞质。结石组GGCX mRNA的表达（0．0799±0．0116）明显低于对照组（0．3887±0．0732和0．3362±0．0694），差异有统计学意义（P〈0．05）。在蛋白水平上，结石组GGCX的表达（27．64±0．29）明显低于对照组（55．22±0．36和53，78±0．33），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论草酸钙尿结石患者肾组织内GGCX表达降低在草酸钙尿结石形成中有重要作用。; 乔建坤郭小林刘继红杨俊王涛曾又林刘波王少刚; 关键词：草酸钙尿结石维生素K

人肾组织γ-谷氨酰基羧化酶基因启动子区克隆与活性分析被引量：1: 2008年; 目的克隆人肾组织γ-谷氨酰基羧化酶（GGCX）基因5’侧翼启动子区，并对其转录活性进行分析。方法对GGCX基因5’侧翼区进行生物信息学分析，预测其转录调控区域；从人肾组织中提取基因组DNA，以其为模板扩增GGCX基因启动子区，通过酶切鉴定及测序分析无误后，将其构建至萤光报告基因载体pGL3-basic中，瞬时转染至Hela细胞，检测萤光素酶水平，从而分析扩增启动子区的转录活性。结果成功克隆长度为804bp（-891～-88）的GGCX基因启动子片段，并构建相应的萤光素酶重组子pGL3-GGCX Promoter，转染Hela细胞48h后检测萤光素酶活性显示，pGL3-GGCX Promoter与空质粒对照pGL3-basic相对萤光素酶值分别为16．924-4、01与0．02±0．01，pGL3-GGCX Promoter萤光素酶活性显著增强（P〈0．05）。Matlnspector等分析显示该片段具有多个转录因子结合位点。结论成功构建含有GGCX基因启动子序列的萤光素酶报告系统，为进一步研究GGCX基因功能及其转录调控奠定了基础。; 杨俊刘继红郭小林王涛王军凯陈美元王少刚叶章群; 关键词：启动子生物信息学萤光素酶

草酸钙尿石症患者肾组织VKDC基因表达及其意义被引量：4: 2007年; 目的:探讨草酸钙尿石症患者肾组织中维生素K依赖性羧化酶(VKDC)基因mRNA表达水平及其与草酸钙尿石形成的关系。方法:以TaqMan实时荧光定量PCR法检测19例草酸钙尿石症肾组织(尿石组)与21例非尿石肾组织(对照组)标本中VKDC基因mRNA的表达,采用2-△△Ct法比较两组标本中VKDC基因mR-NA表达的差异。结果:尿石组与对照组荧光定量检测△Ct值分别为8.996±1.667与6.023±1.234(P<0.05),尿石组VKDCmRNA表达明显降低。结论:草酸钙尿石症患者肾组织中VKDC基因表达明显下降,其表达水平的变化可能与草酸钙结石形成有关。; 杨俊刘继红郭小林王涛王军凯樊龙昌王少刚叶章群; 关键词：草酸钙结石尿石症

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国家自然科学基金(30400442)