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国家自然科学基金(81202118)
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靶向糖原合成酶激酶-3β抗骨肉瘤的实验研究
被引量:2
2013年
目的研究糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)住骨肉瘤细胞增殖小的作用及相关分子机制,探讨其在骨肉瘤靶向治疗中的价值。方法Western blot检测人成骨细胞及骨肉瘤细胞p-GSK-3β(Ser9)表达水平,观察GSK-3β抑制剂及siRNA 干扰对细胞增殖、凋亡的影响,利川凋亡蛋门芯片筛查并验证GSK-3β测控骨肉瘤细胞的分子机制,通过裸鼠体内实验评估靶向GSK-3β对于骨肉瘤的治疗价值。结果在骨肉瘤细胞中p-GSK-3β(Ser9)表达水平明显低于成骨细胞。GSK-3β特异性抑制刹及siRNA干扰均可叫明显抑制骨肉瘤细胞增殖并诱导凋亡蛋白cleave-caspase3表达量明硅上调.通过蛋白芯片筛查显示一组NF-KB凋控的靶基因蛋白survivin、clAP-l、XIAP及Bcl-2明显下调。Western blot验证了上述芯片结果,并发现氯化锂处理后p-IKBα水平下降,核内NF-KB p65衷达带下降、NF-KB双荧光素酶报告系统查测稳定过表达持续活化GSK-3β 细胞中NF-KB转录活性与空载体组细胞体比明显升高,而稳定丁扰GSK-3β 的细胞中NF-KB转录活性与审载体组细胞相比明是炡降。裸鼠体内动物实验发现稳定干扰GSK-3β 和采用氯化锂均可明显抑制骨肉瘤皮下移植瘤的生长。结论GSK-3β 红骨肉瘤中处于相对活化状态,可通过上调NF-KB转录活性渊控骨肉瘤细胞增殖;靶向GSK-3β
谢显彪
唐清连
王晋
黄纲
尹军强
邹昌业
沈靖南
关键词:
骨肉瘤
糖原合成酶激酶3
NF-ΚB
INI1诱导上皮样肉瘤细胞向脂肪方向分化
2020年
【目的】本研究旨在探讨INI1在上皮样肉瘤细胞中作用及机制。【方法】利用Western blot检测并比较上皮样肉瘤细胞中INI1表达水平;免疫组化检测上皮样肉瘤组织标本中INI1的表达;利用Tet-on系统重建上皮样肉瘤细胞VA-ES-BJ中INI1表达;诱导VA-ES-BJ细胞中INI1表达后检测细胞形态、增殖、脂肪相关分子标志,进一步Western blot检测脂肪分化相关转录因子表达及油红染色检测向脂肪方向分化的程度。【结果】在上皮样肉瘤细胞和临床标本中均存在INI1蛋白表达缺失的现象(P<0.05)。通过Tet-on系统在VA-ES-BJ细胞中成功重建INI1表达,经过强力霉素诱导后出现INI1表达上调。持续诱导INI1表达,VA-ES-BJ细胞形态发生改变,胞浆出现大量空泡;细胞增殖速度明显抑制(P<0.05);检测上皮来源细胞标记物,发现Cytokeratin明显下调(P<0.05);检测脂肪细胞相关标志物,发现瘦蛋白、脂联素、脂蛋白脂酶表达明显上调(P<0.05);进一步检测诱导INI1表达后脂肪分化相关转录因子PPAR-γ和CEBP-α表达均明显上调(P<0.05),油红染色呈显著阳性。【结论】上皮样肉瘤中存在INI1蛋白表达缺失现象,重建INI1表达通过上调转录因子PPAR-γ和CEBP-α表达,进而诱导上皮样肉瘤细胞向脂肪方向分化。
谢显彪
温丽丽
温丽丽
邹雨桐
姚浩
彭挺生
关键词:
上皮样肉瘤
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