国家自然科学基金(30200013)
- 作品数：13 被引量：41H指数：3
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- 相关机构：第三军医大学西南医院绍兴文理学院第三军医大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 运用3′RACE验证LongSAGE文库构建后白念珠菌不同菌相的差异表达基因被引量：1
- 2005年
- 目的 鉴定从LongSAGE文库筛选到的白念珠菌不同菌相表达基因差异表达标签JMD8和JSW10所代表基因。方法 诱导白念珠菌菌丝相的表达后,运用3′RACE技术扩增白念珠菌差异表达基因标签基因片段,纯化回收后,T/A连接,经氯化钙法转化大肠杆菌,X gal/IPTG诱导表达,在阳性菌株中抽提质粒后酶切、测序。结果 两个片段均能在GenBank中找到同源序列,Score值小于40 ,Evalue小于0 5。结论 鉴定了白念珠菌LongSAGE标签JMD8和JSW 10代表的基因分别为EFT2和SHMII。
- 张宝军叶庆佾何凤田王鲁周村建郝飞
- 关键词：白念珠菌
- 白念珠菌菌丝的诱导培养被引量：13
- 2004年
- 目的 探讨培养条件对白念珠菌菌丝形成的影响。方法 改变培养基成分、pH值及培养温度 ,诱导白念珠菌芽管 (早期菌丝相 )的形成。结果 M199、164 0培养在pH 7.0、3 7℃振荡培养时可诱导白念珠菌生长为纯的菌丝。
- 周村建郝飞王鲁钟白玉
- 关键词：白念珠菌菌丝
- 白念珠菌ATCC-90028菌丝相的诱导被引量：1
- 2005年
- 目的在不同培养条件下,观察白念珠菌芽管形成率。方法在3种不同培养基中,分别进行不同浓度的孢子振荡培养(pH7.35,37℃),诱导白念珠菌芽管的形成。结果RPMI1640、DMEM培养液中孢子密度为5×106/L时,芽管形成率最高(大于95%)。结论优化培养条件以提高白念珠菌芽管形成率。
- 张宝军叶庆俏周村建李彦唐书谦李芹阶
- 关键词：白念珠菌表型转换芽管
- 以LongSAGE方法寻找不同菌相生长白念珠菌细胞差异表达基因被引量：1
- 2006年
- 目的以长片段基因表达系列分析技术(LongSAGE)寻找酵母相和菌丝相生长的白念珠菌细胞差异表达基因。方法采用LongSAGE方法,分别构建白念珠菌酵母相和菌丝相细胞Long- SAGE标签文库,比较文库获得不同菌相生长白念珠菌细胞差异表达基因。结果成功构建了白念珠菌酵母相和菌丝相细胞的LongSAGE标签文库,比较文库获得了白念珠菌酵母相和菌丝相细胞间差异表达的单基因匹配标签。结论用LorgSAGE方法较完整地获得了白念珠菌酵母相和菌丝相细胞基因表达谱及其丰度的量化信息,文库间比较可获得不同菌相生长白念珠菌差异表达基因。
- 周村建郝飞邓永键王鲁钟白玉李永平
- 关键词：白念珠菌
- 高通量GLGI鉴定及分析白念珠菌LongSAGE标签
- 2007年
- 目的鉴定并初步分析白念珠菌长片段基因表达序列分析(LongSAGE)标签。方法建立了一种高通量鉴定LongSAGE标签的技术,应用该技术可批量扩增白念珠菌LongSAGE标签,使其由17bp扩增至相应的3'cDNA末端,扩增产物TA克隆后进行测序及序列分析(GLGI)。结果30条多重匹配标签中28条得到稳定有效的扩增,40个无匹配标签中30条得到有效扩增,其中21条证实为新表达序列标签(EST),可能代表新的基因,9条和已知基因有一定同源性,可能是已知基因或其同一家族基因。结论应用高通量GLGI技术成功鉴定了白念珠菌LongSAGE标签,为进一步研究白念珠菌菌相转换机制奠定了基础。
- 闫洁周村建郝飞
- 白念珠菌酵母相细胞长片段基因表达系列分析文库的构建和初步分析被引量：3
- 2006年
- 目的构建白念珠菌酵母相细胞长片段基因表达系列分析文库并探讨其基因表达特点。方法采用长片段基因表达系列分析技术(LongSAGE)构建白念珠菌酵母相细胞LongSAGE文库,并从中挑取1000个阳性克隆进行测序。结果成功构建了白念珠菌酵母相细胞LongSAGE文库。1000个测序文件中,共获得标签17773个,代表单一转录本7333种,其中单一匹配标签占16·65%,多重匹配标签占6·59%,推测蛋白标签占16·27%,基因组及粘粒等标签占1·64%,新标签为58·86%。标签拷贝数超过35的33个高表达标签中有11个可能属于新的表达序列。结论LongSAGE是一种能够快速、高通量地研究细胞基因表达谱及其丰度的方法,可发现新的表达序列。
- 周村建郝飞邓永键李永平王鲁钟白玉
- 关键词：念珠菌基因表达谱
- 菌丝相白假丝酵母菌长片段基因表达系列分析文库的构建及结果分析
- 2006年
- 目的构建菌丝相白假丝酵母菌长片段基因表达系列分析文库并探讨其基因表达特点。方法采用长片段基因表达系列分析技术(LongSAGE)构建菌丝相白假丝酵母菌LongSAGE文库,从文库中挑取阳性克隆测序,用SAGEs-oftware对测序结果进行分析和检索,从而了解菌丝相白假丝酵母菌基因表达情况。结果在菌丝相白假丝酵母菌的1 000个测序文件中,共获得标签17 552个,代表单一转录本6 627种,其中单一匹配标签占20.5%,多重匹配标签占6.64%,假设蛋白标签为18.47%,新标签为53.07%。标签拷贝数超过35拷贝的36个高表达标签中有15个可能属于新的表达序列。结论用LongSAGE技术获得了菌丝相白假丝酵母菌基因表达谱及其丰度的量化信息,可以发现新的表达序列,为进一步研究提供了基础。
- 周村建邓永键郝飞钟白玉王鲁李永平
- 关键词：白假丝酵母菌
- GLGI技术初步验证系统性红斑狼疮患者CD4^+、CD8^+T细胞基因表达谱被引量：3
- 2006年
- 目的研究GLGI技术鉴定系统性红斑狼疮患者LongSAGE标签的方法。方法运用GLGI技术,将包括17 bp的SAGE标签及单一碱基和oligo(dT)锚定引物进行PCR扩增,得到表达基因的3′端序列,并确认表达基因。结果单一匹配标签12个有9个获得有效扩增,包括原来的17 bp的SAGE标签序列,其长片段测序后有＞85%的碱基与已知基因相符合,表明为该已知基因。20个无匹配标签中未发现有新的基因。结论GLGI技术能够有效识别基因,LongSAGE-GLGI技术是鉴定SAGE大规模标签库较好的方法。
- 王惠琳邓军郝飞邓永键
- 关键词：红斑狼疮SAGE
- γ干扰素诱导蛋白30基因在系统性红斑狼疮CD4^+T细胞中的表达分析被引量：3
- 2006年
- 目的探讨系统性红斑狼疮(system ic lupus erythem atosus,SLE)患者CD4+T细胞mRNA中干扰素诱导蛋白30基因(IP-30)的表达水平与SLE疾病活动度的相关性。方法收集23例SLE患者和10例正常对照人群的临床资料。取外周血用免疫磁珠法分离出CD4+T细胞,抽提RNA并逆转录合成cDNA,运用GLG I方法从LongSAGE标签库中筛选出IP-30,比较该基因在系统性红斑狼疮疾病活动指数(SLEDAI)不同的SLE患者中表达的差异。结果①SLE患者组IP-30的表达量显著高于正常对照(P=0.01,P<0.05)。SLEDAI≥10组和SLEDAI<10组其IP-30的表达量显著高于正常对照(P分别为0.01和0.047),但两组间比较无显著差别(P=0.149)。②SLE有狼疮肾炎组和SLE无狼疮肾炎组相比IP-30表达量有差异(P<0.05)。③IP-30的表达量随SLE的活动水平升高而明显增加,与SLEDAI具有显著的正相关(r=0.830,P<0.01),与补体C3和外周血白细胞数成负相关(r=-0.517,r=-0.424,P<0.05)。结论CD4+T细胞IP-30水平表达升高提示IP-30可能参与SLE的发病,并对SLE活动度的判断和狼疮肾炎的诊断有一定的意义。
- 王惠琳郝飞游弋邓军
- 关键词：系统性红斑狼疮
- 快速提取白念珠菌总RNA的新方法研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨快速提取理想白念珠菌总RNA的实验方法。方法对静止相和菌丝相的白念珠菌国际标准菌株ATCC90028采用冷酸洗玻璃珠联合Tripure法提取总RNA，用紫外分光光度计测量其OD260、OD280的值，并进行琼脂糖凝胶电泳。结果提取的白念珠菌酵母和菌丝相总RNA产量分别为1．9440、1．9624，且OD260／OD280比值介于1．8～2．0范围内，电泳显示提取的总RNA呈现28srRNA，18srRNA和5srRNA3条清晰的条带。结论冷酸洗玻璃珠联合Tripure新方法快速且完整性好，值得推广。
- 张宝军周武强王鲁唐书谦叶庆佾
- 关键词：白念珠菌RNA
