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李艳文
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- 所属机构:广西医科大学
- 所在地区:广西 南宁市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
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- 目的原核表达日本血吸虫乳酸脱氢酶(SjLDH),对表达产物进行纯化及生物活性鉴定。方法将SjLDH编码序列克隆入pET-28a原核表达载体并转染大肠埃希菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后亲和层析法对表达产物进行纯化,并用聚丙烯酰胺变性凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白印迹(Western blot)、酶联免疫吸附实验(ELISA)、酶活性染色及活性测定进行鉴定。结果成功构建pET28a-SjLDH重组质粒并在大肠埃希菌中获得可溶性表达,亲和层析纯化表达产物。SDS-PAGE及Western Blot结果显示,表达及纯化产物分子量约36kDa,与SjLDH理论分子量相符。ELISA结果表明,重组蛋白具有良好的免疫活性,酶活性染色表明重组蛋白具有乳酸脱氢酶活性,活性单位为379U/mg。结论成功进行SjLDH的原核表达并获得纯化的重组蛋白,重组蛋白具有良好的免疫原性及酶活性,为研究SjLDH的功能奠定了基础。
- 吕刚胡旭初黄灿李艳文徐劲吴忠道余新炳
- 关键词:日本血吸虫乳酸脱氢酶原核表达纯化重组蛋白
- 华支睾吸虫囊蚴脱囊的超微结构观察
- 2023年
- 目的利用扫描电子显微镜和透射电子显微镜对华支睾吸虫囊蚴脱囊的超微结构进行观察和分析。方法取华支睾吸虫阳性麦穗鱼,去除头、鱼鳞和内脏,称重后绞碎,按1 g∶10 ml比例加入人工消化液(成分为0.6 g胃蛋白酶,100 ml生理盐水,1 ml浓盐酸),于37℃消化过夜后反复过滤,体视显微镜下分离成熟囊蚴。加入0.025%胰蛋白酶溶液(pH=7.4),37℃孵育约3 min,将脱囊后尾蚴、未完全脱出后尾蚴、外形较完整囊蚴及脱下空囊分开收集,使用3%戊二醛与1%四氧化锇固定制样。样品使用50%、70%、80%、90%、100%乙醇逐级浸泡脱水(每级10 min,100%乙醇脱水重复3次),100%六甲基二硅烷浸泡3次(每次10 min),干燥后镀膜喷金,使用扫描电子显微镜观察样品;按50%、70%、90%乙醇、1∶1混合液(90%乙醇∶90%丙酮)、90%、100%丙酮逐级脱水(每级10 min,100%丙酮脱水重复3次),依次于丙酮与包埋剂(环氧树脂618)1∶1、1∶3混合液与全包埋剂中浸泡后聚合处理,修块、切片、醋酸铀⁃柠檬酸铅双重染色,使用透射电子显微镜观察样品。结果扫描电镜下可见囊蚴外观出现了局部膨胀或凹陷、褶皱及塌陷、囊壁内外层分离;脱囊形成的线状裂口长、边缘平整,未能脱出的后尾蚴被软塌的囊壁包裹,其上皮棘刺穿囊壁;脱囊后尾蚴背、腹面遍布体棘,腹吸盘明显大于口吸盘,口、腹吸盘内壁结构不同;排泄囊内填满大小不一圆球形排泄颗粒。透射电镜下显示,脱囊后尾蚴体壁为合胞体结构,由外向内可见皮层外质膜下为电子致密的颗粒状基质,基质向表面形成突起,基质内含许多分泌颗粒及大小不等囊泡;皮棘根部从基质膜发出,穿过基质从皮层表面穿出;基层厚度差异较大,内含多个高电子密度分泌小体;外环肌和内纵肌发达,深入到细胞层,经胞质管运送的物质在远端形成囊泡;皮层细胞间物质发达,充满杂乱分布的管状、大小不等�
- 李晓芹李晓芹陈豫吕嘉慧韦帅张立林何姗姗石云良何姗姗
- 关键词:华支睾吸虫超微结构扫描电子显微镜透射电子显微镜
- 华支睾吸虫生活史室内微生态建立被引量:1
- 2019年
- 目的构建华支睾吸虫生活史的室内微小生态环境。方法麦穗鱼饲养池120cm×60cm×50cm,隔成3个区间,纹沼螺饲养盆66cm×40cm×18cm,底部铺塘泥,种植水韭草,24h充氧和抽水循环,12h光照,每2周换水1/2;将华支睾吸虫虫卵和纹沼螺一起放入平皿内感染8h,螺与虫卵比例约1∶50,每周重复1次,连续3次;将收集的尾蚴与麦穗鱼一起放入大烧杯进行尾蚴感染,加水1 000mL,充氧过夜。结果纹沼螺和麦穗鱼均能在饲养池内正常生长与繁殖;纹沼螺感染率约4.9%,麦穗鱼形成的囊蚴数与用于感染的尾蚴数之比约30.65%。结论室内微型华支睾吸虫生活史生态环境构建成功。
- 郑宝杨益超卢作超何勉刘晓泉刘登宇李艳文
- 关键词:华支睾吸虫生活史
- 凌云微小按蚊与元江微小按蚊杂交试验被引量:1
- 2006年
- 目的:观察广西凌云微小按蚊与云南元江微小按蚊之间是否存在生殖隔离。方法:分别在两地的牛房采集胞血的微小按蚊,在实验室单雌驯养2代,用人工交配方法进行杂交试验,观察子1代(F1)的可育性。结果:Y×L组的产卵率极低,卵的孵化率为0,卵内未见胚胎形成,显示不育。Y×F1的孵化率、化蛹率均明显低于亲本,可育性低。结论:广西凌云微小按蚊与云南元江微小按蚊已存在部分生殖隔离,系两个不同的亲缘种。
- 石焕焕田春林李艳文卢作超
- 关键词:微小按蚊杂交试验生殖隔离
- 慢性腹泻患者1185例感染人芽囊原虫的临床分析被引量:13
- 2012年
- 目的了解慢性腹泻患者人芽囊原虫感染和患病情况的临床特点,并分析其原因,为采取相应的防治措施提供科学依据。方法对在我院2011年1月~2011年12月就诊的1 185例慢性腹泻患者进行粪便检查,并对人芽囊原虫阳性患者的感染情况与实验室检测结果进行调查分析。结果受检患者人芽囊原虫感染率为12.24%,其中有粘液脓血便的感染率明显高于其他类型腹泻者(P<0.01);不同性别、年龄间感染率差异无统计学意义(P>0.05);农民感染率最高(20.29%)。实验室辅助检查中,69.66%感染患者中有血红蛋白降低,80.69%感染患者IgG、IgM、IgA均正常,86.90%感染者CD3+、CD4+表达水平降低,CD8+表达水平相对稳定,CD4+/CD8+比值下降。结论人芽囊原虫感染是慢性腹泻的一个重要病原体,其致病作用不容忽视。
- 胡缨李艳文卢作超
- 关键词:人芽囊原虫
- 粪类圆线虫感染25例临床分析被引量:13
- 2013年
- 粪类圆线虫主要分布在热带、亚热带卫生条件较差的农村及城市周边地区。其主要感染方式与钩虫感染方式类似,由粪类圆线虫丝状蚴通过皮肤或黏膜侵入人体寄生、发育而引发疾病。由于其缺乏特殊的临床症状,易被忽视,导致漏诊或误诊。现将近年我院收治的25例确诊为粪类圆线虫感染的临床资料进行回顾性分析,报道如下。
- 胡缨谢周华李艳文
- 关键词:粪类圆线虫
- 伯氏疟原虫CSP片段与肝细胞特异结合的生物学特性
- 2013年
- 目的明确去除伯氏疟原虫CSP基因的中央重复序列不影响该蛋白的膜定位及与肝细胞特异结合的特性。方法将去除中央重复序列的伯氏疟原虫CSP基因片段(PbCSP’)克隆入原核表达质粒pGEX-4T-1,在大肠杆菌BL21/DE3中诱导表达,纯化重组蛋白,免疫大鼠获得相应抗体;用流式细胞仪筛选表达EGFP-PbCSP’的Hela细胞,应用Confocal显微镜及免疫组化方法观察表达的蛋白是否定位于细胞膜及能否与小鼠肝癌细胞(H22)特异结合。结果 pGEX-PbCSP’的原核表达及纯化、免疫大鼠获得抗体,在Hela细胞表达的EGFP-PbCSP’蛋白定位于细胞膜,并能与小鼠肝癌细胞(H22)特异结合。结论去除中央重复序列的伯氏疟原虫CSP片段与肝细胞特异结合,为进一步研究其是否可作为肝细胞的靶向分子奠定了基础。
- 吴姿蓉余新炳李艳文陈晓湘袁竹青马长玲
- 关键词:伯氏疟原虫CSP肝细胞
- 华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因的克隆表达和重组蛋白的免疫学分析被引量:3
- 2008年
- 目的对新发现的华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)的组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因进行克隆、表达和免疫学初步研究。方法将华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因(去除了信号肽编码序列)克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白免疫SD大鼠制备抗血清。用蛋白印迹(Western blotting)进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠杆菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别,表明其具有免疫原性;并且能识别感染了华支睾吸虫的SD大鼠血清,表明具有免疫反应性。结论华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫原性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。
- 赵俊红胡旭初徐劲胡凤玉周红娟胡慧霞郑小凌李艳文余新炳
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- 慢性病患者合并人芽囊原虫感染的情况调查被引量:10
- 2017年
- 目的了解慢性病患者的人芽囊原虫感染情况和临床特点,为采取防治措施提供依据。方法对2016年1月-10月广西医科大学第一附属医院收治的913例慢性病患者进行人芽囊原虫的病原学检查,并分析感染情况。结果受检者中人芽囊原虫感染167例(18.29%)。单因素分析提示,性别、年龄、教育程度均与人芽囊原虫感染无关(P>0.05)。多因素分析显示,人芽囊原虫感染与近1年饲养宠物、个人卫生习惯、营养状况和免疫功能密切相关(P<0.05)。结论慢性病患者中存在一定程度人芽囊原虫感染,应将近1年饲养宠物、个人卫生习惯差、营养状况差和免疫功能差的慢性病患者列为重点防治对象,同时将人芽囊原虫的病原学检查作为其常规检测项目。
- 胡缨李艳文刘晓泉史吉莹
- 关键词:慢性病人芽囊原虫
- 广西、海南和云南三地微小按蚊DNA的限制酶切片段长度多态性分析被引量:6
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- 目的 :探讨广西、海南和云南三地微小按蚊之间的基因差异。方法 :从三地单雌线蚊虫提取 DNA,然后分别用 Ava I、Bam HI、Pst I、Bgl I、Hinf I和 Hae 6种限制性核酸内切酶消化 ,进行琼脂电泳分析。结果 :三地微小按蚊的 Ava I、BamHI和 Pst I酶切区带有差异 ,Bgl I的酶切区带完全相同 ,而 Hinf I和 Hae 两种酶不显区带。结论 :三地微小按蚊有基因结构差异 ,Ava I、 Bam HI和 Pst I
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- 关键词:微小按蚊DNA