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多义性特征对“没VP 之前,S”生成的制约: 2025年; 多义性特征深刻制约着“没VP之前,S”构式的生成。首先,从共时层面看,“没VP之时,S”与“VP之前,S”这两个源构式都具有多义性,只有二者语义类型相同时,才能进行构式整合。其次,从历时层面看,新构式被整合生成后可以与源构式同步发展,从而扩展出新的语义类型。最后,从跨语言层面看,新构式的语义类型呈现出蕴含共性特征,这是构式生成过程中认知心理与社会规约双重机制共同作用的结果。; 鲁承发; 关键词：羡余否定

从“随同”到“参照”——论事件融合构式“跟着NP+VP”的形成与发展: 2025年; 事件融合构式“跟着NP+VP”,由两个行动关联事件融合为一个事件而成,其形成和发展是事件融合和语法化的产物。构式共时层面多元化共存,具有承继性和多义性,可分为随同构式和参照构式两大类型。随同构式为原型构式,围绕原型构式扩展到参照构式,构式从低融合走向高融合,构式化程度不断增强。因其结构紧凑,语境适用面广,表达功效特殊,具有较强的人际互动功能和语篇统辖功能,该构式被广泛使用于文章标题、视频标题、书名、影视名、栏目名等,呈现标题化趋势。; 陈景元蒋雯; 关键词：构式

基于真核表达塞内卡病毒A VP2蛋白的间接ELISA检测方法: 2025年; 为建立检测塞内卡病毒A(SVA)抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),本试验利用昆虫杆状病毒表达系统表达SVA的主要结构蛋白和保护性抗原VP2,通过间接免疫荧光试验(IFA)验证VP2的免疫反应性,并使用氨基三乙酸镍(NiNTA)树脂亲和纯化重组VP2蛋白。以纯化的VP2蛋白为包被抗原,利用棋盘滴定法确定最优的抗原包被浓度和待检血清稀释度,通过优化反应条件和确定临界值,建立了检测SVA抗体的间接ELISA检测方法,并评估了其特异性、敏感性、重复性及与IFA的检测符合率。结果显示,重组VP2蛋白在杆状病毒感染的Sf9细胞内呈现可溶性表达,能够被SVA VP2特异性单克隆抗体2F5识别;经Ni-NTA纯化后,获得了分子量约31 kDa的重组VP2蛋白;间接ELISA的最佳抗原包被浓度为2μg/mL,最佳血清稀释度为1∶100,最佳酶标二抗稀释度为1∶10000;阴阳性临界值为0.287;与口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型抗血清无交叉反应;批内与批间变异系数均低于10%。利用建立的间接ELISA检测了实验室保存的52份猪血清样本,与IFA的检测符合率为96.15%(50/52)。综上,本试验间接ELISA的成功建立为SVA抗体检测和流行病学调查提供了有力工具。; 裴宗飞于凯蓝安欣娜陈俊雯张永宁; 关键词：VP2蛋白昆虫杆状病毒表达系统间接ELISA

保定地区猫泛白细胞减少症病毒VP2基因的遗传进化分析: 2025年; [目的]了解保定地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus, FPV)的流行情况以及其VP2基因遗传变异情况。[方法]从保定市多家宠物医院随机采集20例疑似患猫泛白细胞减少症(feline panleukopenia, FP)的猫粪便和鼻腔分泌物样本,利用PCR扩增、测序获得FPV VP2全基因序列并对其进行分析,利用Mega 7.0软件构建系统进化树,采用MegAlign软件对其核苷酸序列相似性及关键氨基变异位点进行分析。[结果]20例患猫粪便样品中扩增出16条长度为1 755 bp的FPV VP2特异性条带,序列分析表明,FPV VP2基因全长为1 755 bp,分离获得的FPV均属于G1分型,与日本分离株V211(登录号:AB054227)亲缘关系较近,与FPV标准株CU-4(登录号:M38246)亲缘关系较远,16条FPV VP2基因之间核苷酸序列相似性为99.1%~100%。16条VP2蛋白序列的13个关键氨基酸位点均相同,与FPV标准株CU-4相比,在第101位氨基酸处出现I-T突变;与5个参考毒株CPV VP2的关键氨基酸位点进行比对,仅第101位氨基酸位点相同,其他位点均存在不同程度变异。[结论]保定区主要流行G1型FPV,且其VP2基因遗传稳定性较强。研究结果丰富了FPV的流行病学资料,为保定地区FPV预防提供了理论依据。; 邹畅胡月李海花乔家运; 关键词：VP2基因遗传进化

猫杯状病毒VP1蛋白原核表达及间接ELISA检测方法的建立: 2025年; 旨在建立一种灵敏、准确、高通量检测猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)抗体的间接ELISA方法。本研究通过优化表达条件,在大肠杆菌中表达FCV的VP1蛋白,对重组蛋白进行镍离子亲和层析纯化和透析复性,通过SDS-PAGE和Western blot验证重组蛋白;以重组VP1蛋白为包被抗原建立检测FCV抗体的间接ELISA方法,通过方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度和抗体最佳稀释度,优化抗原包被条件、样品孵育时间、封闭液种类等条件,并对其性能进行验证。结果:表达的目的蛋白条带清晰、大小正确,与FCV阳性血清具有良好的反应性,建立的间接ELISA方法检测6份FCV阴性血清,猫细小病毒(feline parvovirus, FPV)阳性血清,猫疱疹病毒(feline herpesvirus, FHV)阳性血清均为阴性,对FCV阳性血清的最低检出效价可达1∶10 240,组间与组内变异系数均小于10%,与商品化试剂盒相比符合率达100%。综上,本研究建立的间接ELISA方法具有良好的灵敏度、重复性和符合率,与其他猫常见病毒阳性血清不发生交叉反应,可以用于临床样品的检测,为FCV感染的诊断、防控、疫苗免疫效力评价提供了技术手段。; 姬晶晶王彬何昭群李嘉豪单衍可刘斐; 关键词：原核表达间接ELISA

辽宁省沈阳市猫细小病毒VP2基因克隆与遗传进化分析: 2025年; 为了解沈阳市猫细小病毒(FPV)的遗传进化情况,探究FPV免疫失败的原因,收集2022年该地区FPV感染猫肛拭子,采用PCR扩增FPV VP2基因,对VP2基因测序并进行同源性比对、主要编码氨基酸位点分析与遗传进化树绘制。结果显示;获得了7个FPV VP2基因片段,全长均为1755 bp,与50株参考毒株VP2基因同源性为98.8%~99.9%;与标准株和疫苗株相比,6个获得基因编码的VP2蛋白第91位点发生了改变,其中2个获得基因编码的VP2蛋白第295位点发生了改变;遗传进化树显示,FPV VP2基因分为3个基因群,7个获得基因中有6个位于G1群、1个位于G3群,与国内近年来流行毒株亲缘关系近,但与疫苗株和标准株均不在同一个基因群(G2群)。结果说明;沈阳市流行的FPV逐渐进化形成了不同于疫苗株和标准株的基因群,因此有必要加强FPV感染的流行病学监测,研发针对性更强的疫苗。; 李晔; 关键词：VP2基因同源性遗传进化

A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体制备与竞争ELISA方法的建立: 2025年; 依据A型塞内卡病毒(SVA)结构蛋白VP2基因序列构建原核表达质粒pET-30a-VP2,经转化和诱导,表达出VP2重组蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,采集血清获得VP2的多克隆抗体。用间接ELISA方法测定血清中VP2抗体效价,并用Western blot与IFA验证其特异性。随后建立竞争ELISA方法,并对实验室收集的2016-2019年广西11个地区64个规模猪场592份猪血清进行SVA抗体检测。结果显示,诱导表达出的重组VP2蛋白主要以可溶性形式表达,血清中VP2抗体效价大于1∶64000,且制备的VP2抗体能特异结合SVA感染细胞中的VP2蛋白。竞争ELISA检测结果显示广西地区猪场SVA血清阳性率高达76.6%,血清样品阳性率高达55.9%,研究结果为SVA的检测和研究奠定了基础。; 何启杰农作荣王豪牛晨霞莫勇芳欧阳康陈樱陈樱黄稳妃黄伟坚; 关键词：VP2蛋白原核表达多克隆抗体竞争ELISA

猪轮状病毒VP6蛋白截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立: 2025年; 【目的】通过构建猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6截短蛋白(第177—382位氨基酸)的原核表达系统,建立检测PoRV抗体的间接ELISA方法,为PoRV血清学监测提供检测手段。【方法】设计1对针对截短VP 6基因的特异性引物,以pMD19-T-VP6重组质粒为模板扩增VP 6截短基因。利用pET-32a(+)原核表达载体构建pET32a-PoRV-VP6重组质粒。以大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞为宿主菌,对重组质粒进行诱导表达,并优化表达条件。利用His标签镍柱对pET32a-PoRV-VP6重组蛋白进行纯化,以此作为包被抗原,通过单一变量法优化抗原包被浓度、血清稀释度、二抗稀释度及一抗、二抗孵育时间等工作条件。确定间接ELISA方法的阴阳性临界值,检验其特异性、敏感性、重复性及符合性,并对2021—2024年采自贵州地区不同猪场的384份临床猪血清进行检测。【结果】试验成功构建pET32a-PoRV-VP6重组表达载体,实现VP6蛋白的原核截短表达,蛋白分子质量大小约40 ku,具有良好的反应原性。对间接ELISA方法条件进行优化,确定VP6包被抗原最佳浓度为2μg/mL、阳性血清稀释度为1∶100、血清样品和二抗孵育时间均为60 min、TMB反应时间为10 min、阴阳性临界值(D 450 nm)为0.410。建立的间接ELISA方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等病毒标准阳性血清不发生反应,特异性强;批内和批间重复试验变异系数均<10%,重复性好;与PoRV A型ELISA抗体检测试剂盒的总体符合率为96.80%。间接ELISA方法检测临床384份猪血清样品结果显示,样品总阳性率为28.91%。【结论】本研究成功实现了PoRV VP6蛋白的截短表达,并建立了PoRV间接ELISA抗体检测方法,适用于临床PoRV抗体检测和疫苗免疫效果评价。; 潘向英曾智勇梁海英汤德元王彬叶泥田红利边孟婷柳佳佳黄书; 关键词：截短表达间接ELISA

猪捷申病毒5型VP1蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立: 2025年; 旨在建立针对猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)5型的间接ELISA检测方法,为其防控提供物质储备。PTV是猪的一种急性、烈性病原,以高发病率和高致死率为主要特征。其临床表现包括脑炎、肺炎、繁殖障碍、心肌炎及腹泻等多种症状。但该病原亚型众多,不同亚型间临床表现差异较大,且缺乏高效、特异的血清学检测方法,阻碍了对PTV-5的防治。本研究针对危害较大的PTV-5构建了pET-30a-VP1重组质粒,通过原核表达获得了VP1蛋白,以纯化的VP1为包被抗原,经条件优化成功建立了针对PTV-5的间接ELISA方法。该方法与常见猪源病毒标准阳性血清无交叉反应,最低检测稀释度为1∶3200,批内与批间变异系数均低于10%,具有良好的特异性、敏感性和重复性。利用该方法对东北地区279份临床样本进行检测,其阳性率为67.74%,与报道的流行情况相符。本研究建立的间接ELISA检测方法综合评价良好,为PTV-5的临床检测提供技术支持。; 邵永恒倪民婷高梦玲汤娇张耕馨林圣宇刘光亮陈佳宁王雯慧; 关键词：猪捷申病毒 VP1蛋白原核表达间接ELISA

一种表达NDV F基因、H9亚型AIV HA基因以及IBDV VP2基因的重组火鸡疱疹病毒及其应用: 本发明提供了一种表达NDV F基因、H9亚型AIV HA基因以及IBDV VP2基因的重组火鸡疱疹病毒及其应用，属于基因工程疫苗领域。本发明利用重组克隆技术，将包含新城疫病毒F基因和H9亚型禽流感病毒HA基因的表达框架插...; 李凯田世茂李晓涵王笑梅李守军车艳杰朱秀同

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