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- 产细菌素海洋乳酸菌的筛选及细菌素抑菌机制
- 2024年
- 【目的】筛选海洋源产细菌素乳酸菌,探讨细菌素抑菌机制。【方法】从市售海鱼的肠道中筛选出一株对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大肠埃希菌(Escherichia coli)有较强抑菌效果的菌株GOFEL226,通过16S rDNA序列鉴定乳酸菌,用乙酸乙酯提取细菌素,利用分光光度法、电导率法、扫描电镜技术探究细菌素的抑菌机制。【结果】菌株GOFEL226为戊糖乳植物杆菌(Lactiplantibacillus pentosus),GFEB226细菌素对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的最小抑菌质量浓度为0.883 mg/mL;其对指示菌的生长有明显的抑制作用,可导致细胞的蛋白质、核苷酸、带电离子泄漏到细胞外,对细胞膜具有破坏作用。【结论】GFEB226细菌素可通过破坏革兰阳性和革兰阴性菌的细胞膜,使其胞内物质泄漏到胞外,进而导致细胞的死亡。
- 赖崇熙刘唤明贾瑞博邓楚津洪鹏志赵飞
- 关键词：细菌素抑菌机理抑菌活性
- 新型R型噬菌体尾样细菌素对MRSA的抗菌活性研究
- 2024年
- 目的探索阴沟肠杆菌SHAMU191747所分泌的新型R型噬菌体尾样细菌素(phage tail-like bacteriocin,PTLB)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的抗菌活性。方法琼脂平板拮抗试验和肉汤微量发酵试验,检测阴沟肠杆菌SHAMU191747对MRSA的拮抗活性。超高速离心法和密度梯度离心法,制备阴沟肠杆菌SHAMU191747发酵上清液粗提物。使用透射电镜检测粗提物中有无新型R型PTLB。琼脂平板点种法,验证粗提物对MRSA的抗菌活性。采用SDS-PAGE电泳检测新型R型PTLB的分子量。结果阴沟肠杆菌SHAMU191747分泌新型R型PTLB,对MRSA具有强拮抗效应。新型R型PTLB的分子量约35 ku,能够高效杀伤MRSA;尾鞘未收缩的功能性分子的物理尺寸为(142.7±4.3)×(13.8±0.6)nm,尾鞘收缩的非功能性分子的物理尺寸为(57.7±1.2)×(20.8±1.5)nm。结论阴沟肠杆菌SHAMU191747产生的新型R型PTLB能够高效杀伤MRSA,具有开发成新型抗菌药物的潜力,临床应用前景很大。
- 唐伟刘颖唐震海唐颖李昕姚杰李维祖徐元宏周强
- 关键词：阴沟肠杆菌细菌素金黄色葡萄球菌耐甲氧西林金黄色葡萄球菌抗菌活性
- 芽胞杆菌细菌素及其在食品防腐保鲜中的应用
- 2024年
- 芽胞杆菌具有极强的生存和环境适应能力,是自然界分布广泛的优势菌属。芽胞杆菌细菌素是由其核糖体产生的多功能蛋白质物质,抑菌范围广泛,对真菌和细菌都具有很好的抑菌效果,与其他非芽胞类菌株产的细菌素相比更具开发价值。本文综述了芽胞杆菌细菌素的分类、特点、抑菌机制及其在食品防腐保鲜中的应用研究进展,以期为芽胞杆菌细菌素的深入研究与开发提供参考。
- 娄梦雪乌日娜纪帅奇张淘崴吕福军武俊瑞
- 关键词：芽胞杆菌细菌素贮藏
- 细菌素纯化技术及其应用研究进展
- 2024年
- 细菌素是一种由细菌在核糖体内合成并释放到胞外,具有抑菌或杀菌效果的多肽。大量研究表明细菌素具有调节肠道微生物种群、抗炎和抗癌等作用。然而,细菌素纯化成本高、产量低且存在一定环境污染是限制细菌素广泛应用的重要因素。提高细菌素的纯化倍数和回收率是其纯化的关键,增加细菌素的比活力和产量对其生产应用至关重要。合理选择纯化技术,可以有效提高细菌素的产量、纯度和回收率。由于细菌素的分子量和带电荷性质具有差异性,应根据其特性选择不同的纯化技术。细菌素的纯化包括粗分离纯化和精细分离纯化,粗分离纯化技术包括硫酸铵沉淀法、有机溶剂萃取法、大孔树脂法和透析法,精细分离纯化技术包括离子交换层析法、凝胶过滤层析法、反相高效液相色谱法等。广泛应用的细菌素纯化技术包括硫酸铵沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析和反相高效液相色谱等,并且由这几种技术组合的两步法和三步法纯化技术近几年应用较多。近年来,快速蛋白液相色谱等非传统的纯化技术逐渐应用于细菌素的精细分离纯化。高效、低成本、无污染、绿色环保的细菌素纯化技术是其进一步研究的关键,这些技术难点的突破将为细菌素在医疗领域中的应用奠定基础。本文对细菌素的纯化技术及其应用进行归纳分析,可为细菌素的进一步开发与应用提供参考。
- 龙赟而潘瑞雪赵一宁彭金菊马驿
- 关键词：细菌素多肽纯化硫酸铵沉淀凝胶过滤层析
- 植物乳杆菌MU-6细菌素理化特性研究及其编码基因挖掘
- 2024年
- 【目的】研究1株乳杆菌所产细菌素的稳定性,并挖掘其编码基因簇。【方法】取来自内蒙古自治区巴彦淖尔市的传统泡菜置于MRS肉汤中,37℃培养12 h分离细菌。以鼠伤寒沙门菌为指示菌进行抑菌试验,对分离菌株进行筛选,并对菌株进行16S rRNA测序、BLAST比对分析。根据蛋白酶、温度、pH和紫外线四类指标评价分离菌株所产细菌素的稳定性,使用全基因组测序技术获得菌株基因组特征信息并挖掘其潜在的细菌素编码基因簇。【结果】试验从泡菜中筛选得到1株产抗鼠伤寒沙门菌细菌素的乳杆菌,相似性比对结果显示,分离菌株与植物乳杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)相似性达98%,将其命名为MU-6。MU-6的发酵上清浓缩液经过排酸处理后,试验组MRS抑菌圈直径明显小于空白对照组;过氧化氢处理后,试验组抑菌圈直径基本未发生变化;经蛋白酶处理后,试验组抑菌活性下降。MU-6所产细菌素在100℃、pH 3.0~5.0、紫外线照射条件下仍具有较高抑菌活性。全基因组测序结果显示,菌株MU-6基因组长2782959 bp,预测到3129个基因,GC含量为44.43%。基因簇挖掘结果显示,菌株MU-6存在Plantaricin J、Plantaricin A、Plantaricin E、Plantaricin F等7种核心肽,其中大多数属于ClassⅡb类细菌素。【结论】本研究筛选到1种理化特性稳定且抑菌活性良好的植物乳杆菌细菌素,其具有良好的抗菌作用,是具有应用前景的天然替抗剂。
- 苏惠王云飞赵新凌刘咪咪邹鸣晓董文龙李国江尹柏双
- 关键词：植物乳杆菌细菌素鼠伤寒沙门菌全基因组测序
- 鼠李糖乳杆菌细菌素WO-A/2的表达及其抗菌特性
- 2024年
- 为建立鼠李糖乳杆菌细菌素替抗、防腐应用平台,探究鼠李糖乳杆菌细菌素的抗菌特性,利用DNASTAR软件对鼠李糖乳杆菌细菌素进行全基因序列分析,确定了鼠李糖乳杆菌细菌素的主要调控基因为wo-a/2,利用原核表达的方法表达细菌素WO-A/2,并对WO-A/2的可溶性、诱导表达条件、免疫原性、溶血活性、抑菌特性进行了分析。结果表明,作者成功构建了pET-32a-wo-a/2质粒,表达了鼠李糖乳杆菌细菌素WO-A/2,其主要以包涵体的形式存在。当表达pET-32a-wo-a/2质粒的菌株接种于含Amp^(+)的LB液体培养基中培养,以终浓度1.0 mmol/L的IPTG诱导8 h后,细菌素WO-A/2的表达量最大。通过双层牛津杯血琼脂平板法验证表明,不同浓度的鼠李糖乳杆菌细菌素WO-A/2均无溶血活性。采用双荧光染色法,通过激光共聚焦显微镜观察到细菌素WO-A/2可促使金黄色葡萄球菌凋亡。该研究为鼠李糖乳杆菌细菌素成为安全可靠的生物替抗剂提供了依据。
- 韩岳峰焦明马慧君李松建金山
- 关键词：鼠李糖乳杆菌细菌素抗菌肽感受态细胞
- 产细菌素屎肠球菌F11.1G的生物学特性分析
- 2024年
- 【背景】随着滥用抗生素导致耐药问题日益严重,逐渐破坏动物健康与生态环境。为应对这一全球性公共威胁,多国禁止把抗生素作为食品和饲料添加剂,益生菌的替代使用应运而生。【目的】对产细菌素屎肠球菌(Enterococcus faecium)F11.1G的生物学特性作全面分析,以保证该菌株在生产中的合理及安全应用。【方法】通过热稳定性试验、耐酸试验和耐胆盐试验测定其耐热、耐酸和耐胆盐性能;通过药敏试验探究其耐受药物能力;通过表面疏水性试验、自凝聚性试验间接探究其对细胞的黏附能力;通过蛋白酶耐受试验研究其在蛋白酶作用下活性作用的强弱。【结果】屎肠球菌F11.1G发酵上清液具有较强的热稳定性,在110℃条件下仍然能够发挥抑菌作用,而最佳生长温度为37℃。当pH 5.9时,菌株生长情况较好且存活率最高,随着pH的降低,其生长受到抑制,当pH值降低为1.8时,菌株仍可生长,但存活率仅有9%。胆盐浓度在0.10%时存活率达140.0%,胆盐浓度在0.15%时,存活率达126.6%,而胆盐浓度在0.20%时,存活率为96.6%;菌株对头孢吡肟、丁胺卡那、庆大霉素、诺氟沙星、红霉素、罗红霉素、多黏菌素B、林可霉素、链霉素、新霉素、甲硝唑、克林霉素、制霉菌素、甲氧苄啶、阿奇霉素和卡那霉素耐受;对头孢他啶、左氧氟沙星、环丙沙星中度敏感;对青霉素、头孢唑啉、头孢呋辛、氯霉素、四环素、多西环素、替考拉宁、克拉霉素和呋喃妥因高度敏感。菌株F11.1G对正己烷、二甲苯、乙酸乙酯和二氯甲烷的疏水率分别为84.29%、25.75%、31.26%和15.08%。菌株F11.1G在3、6、9、12、15和18 h的自凝聚率分别为51%、54%、76%、80%、83%和84%。在蛋白酶K作用下,对大肠杆菌(Escherichia coli)和沙门氏菌(Salmonella)的抑菌效果明显减弱,抑菌圈直径分别为13.05 mm和11.28 mm,抑菌率下降幅度分别为52%和58%,而在胰蛋白�
- 万颖王明根朱振宇白天天杨成郭雪峰
- 关键词：细菌素生物学特性
- 基于蛋白质组学技术对植物乳杆菌YP36细菌素的抑菌机制研究
- 2024年
- 为深入了解植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)YP36细菌素的抑菌机理,该研究利用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)联用非标记定量蛋白质组学技术对细菌素处理前后植物乳杆菌SL32-2差异表达蛋白进行鉴定,并对差异蛋白进行代谢功能分析。结果表明,细菌素处理前后植物乳杆菌SL32-2发酵液中鉴定到的蛋白分别为1999个、2005个,显著上调和下调的蛋白质分别有15个和59个,另外有26个蛋白消失,33个蛋白诱导表达。所鉴定蛋白质中酶占比最大,其次为转运蛋白。基因本体论(GO)富集分析表明,显著性差异表达蛋白的功能条目共99条,主要集中在肽聚糖分解代谢和细胞壁大分子分解代谢、碳水化合物代谢以及嘧啶核苷酸代谢和生物合成等方面。京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析表明,差异蛋白共涉及淀粉和蔗糖代谢途径、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢途径、辅因子生物合成途径和嘧啶代谢途径等53条通路。
- 王婷来欢欢赵微崔美林张秀红
- 关键词：细菌素高效液相色谱-串联质谱蛋白质组学
- 发酵蔬菜来源具抑菌活性明串珠菌的筛选及其细菌素基因簇挖掘
- 2024年
- 为提高发酵蔬菜的安全性和保藏性,从来自云南传统发酵蔬菜的8株明串珠菌中筛选出1株对食源性致病菌和引起泡菜过酸化的细菌抑制效果好的肠膜明串珠菌AP7。通过排除酸和H2O2影响及蛋白酶敏感性确定AP7的主要抑菌物质,分析其酸稳定性和热稳定性,根据AP7的全基因组序列挖掘潜在的细菌素基因簇。结果表明:排除酸及H2O2的影响后,菌株的发酵上清液仍具有明显抑菌活性,经蛋白酶处理后,抑菌效果明显下降,推测AP7发酵上清液浓缩液中的抑菌物质为细菌素;该细菌素对pH变化敏感,热稳定性高,分子质量在6.51~14.4 kDa;全基因组测序表明,菌株AP7全基因组包含1条染色体(1948310 bp)和2个质粒(37366和20698 bp),GC含量37.7%;存在1个以Enterocin_X_chain_beta细菌素为核心的基因簇,其编码产物预测为带正电的亲水性稳定蛋白,二级结构以α-螺旋为主,三级结构主要由两端松散肽链和中间α-螺旋构成。综上,产细菌素的肠膜明串珠菌AP7具有优良抑菌性能,有潜力应用于酸性食品的发酵和防腐。
- 刘毕琴陈骏飞罗义勇赵勇万幸蔡英丽唐蓉史巧李宏
- 关键词：发酵蔬菜肠膜明串珠菌全基因组测序细菌素
- 豆酱源枯草芽孢杆菌S1-2产细菌素分离鉴定及其稳定性研究
- 2024年
- 本研究首先从东北传统豆酱中分离筛选出一株具有良好抑菌作用的菌株,结合16S rDNA与持家基因gyrA测序分析等方法对菌株鉴定。其次,利用乙酸乙酯萃取法对其所产细菌素进行粗提,使用葡聚糖凝胶Sephadex-G50和高效液相色谱(HPLC)技术进一步纯化,结合SDS-PAGE和液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)技术进行鉴定。最后通过最小浓度实验与生长抑制曲线分析了细菌素对金黄色葡萄球菌的抑制效果,并探究了细菌素对热、酸碱和蛋白酶的稳定性。结果表明,枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株S1-2对金黄色葡萄球菌和单增李斯特氏菌抑菌效果最好,该菌株产生的细菌素经分离纯化鉴定为subtilosin A,分子量约为3 kDa,对金黄色葡萄球菌和单增李斯特氏菌有明显的抑制效果,对金黄色葡萄球菌的最小抑制浓度为0.625 mg/mL。该细菌素在20~80℃抑菌活性稳定,且在100~120℃仍表现出抑菌活性;对酸碱耐受性较高,经过pH为1、10的强酸强碱处理后仍表现出抑菌活性,在pH6.0~8.0的范围内表现出最高的抑菌活性;能够被蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶水解。综上,枯草芽孢杆菌S1-2与其产生的细菌素subtilosin A在食品生物防腐中具有较强的研究和应用潜力。
- 张淘崴乌日娜纪帅奇娄梦雪马颖武俊瑞
- 关键词：枯草芽孢杆菌细菌素分离纯化抑菌
