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USP9X对Akt磷酸化水平及血小板活化的影响
2024年
目的 探讨血小板中去泛素化酶USP9X的表达及其对血小板功能的影响。方法 通过聚合酶链式反应和免疫印记方法检测人和小鼠血小板中USP9X的表达情况;分离制备年轻小鼠和老年小鼠的血小板,检测USP9X的表达变化;采用USP9X特异性抑制剂检测USP9X对血小板聚集释放及铺展功能的影响;收集激活不同时间点的血小板蛋白裂解液,并进行免疫印记检测磷酸化Akt的变化。结果 人血小板与小鼠血小板在mRNA水平和蛋白水平均表达USP9X。相对于年轻小鼠,老年小鼠血小板中USP9X的表达明显升高(0.87±0.099 vs 1.05±0.980,P<0.05)。使用USP9X的特异性抑制剂提前30 min孵育血小板,之后检测血小板的聚集、释放及铺展功能,结果显示,相比于对照组,USP9X抑制剂处理组的血小板的聚集和释放水平明显下降(P<0.05);相比于对照组,抑制剂处理组45 min的铺展面积显著降低。最后,免疫印记结果显示,USP9X抑制剂处理组的血小板的Akt磷酸化水平明显下降。结论 人和小鼠的血小板表达USP9X,USP9X可促进血小板的聚集释放及铺展,并可影响Akt的磷酸化水平,USP9X的抑制剂或可成为潜在的临床血栓干预靶点。
贾雪梅邵树军周璐洁杜丹心卢煌莹陈诚夏荣
关键词:血小板血栓AKT磷酸化
ATP含量与外源酶添加对罗非鱼肌原纤维蛋白磷酸化水平的影响
2024年
蛋白质磷酸化修饰可影响肌肉品质,为探究外源酶添加对罗非鱼肌原纤维蛋白蛋白质磷酸化水平的影响,在向罗非鱼肌原纤维蛋白溶液中分别加入蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)后进行体外孵育,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和荧光染色测定不同时间段内的磷酸化水平变化。并通过将罗非鱼肌肉浸泡在不同浓度ATP溶液中测定肌原纤维蛋白的蛋白磷酸化水平以探究ATP对其的影响。结果显示,在0~72 h,PKA组磷酸化水平均显著高于对照组和AP组,PKA组整体磷酸化水平从0 h的0.35±0.01上升至12 h的0.37±0.01,而后下降至72 h的0.29±0.01,呈先上升后下降的趋势,其中,肌球蛋白重链磷酸化水平和肌动蛋白磷酸化水平分别从0 h的0.73±0.01、0.86±0.01下降至72 h的0.58±0.02和0.68±0.01。当孵育时间为0、4、24和48 h时,3组磷酸化水平均具有显著差异。在外源添加0.3 mol/L ATP后,结果显示肌原纤维蛋白整体磷酸化水平(0.46±0.00)显著高于对照组(0.42±0.01)。PKA可促进罗非鱼肌原纤维蛋白磷酸化修饰,AP则使其去磷酸化。研究表明,宰杀后罗非鱼肌肉中的ATP含量、PKA及AP活性水平是影响蛋白质磷酸化水平的关键因素。本研究可为探明罗非鱼品质变化机制与调控策略提供理论依据。
喻叶魏涯陈胜军陈胜军岑剑伟黄卉李春生岑剑伟王悦齐冯阳李春生
关键词:罗非鱼肌原纤维蛋白蛋白质磷酸化蛋白激酶A
灯盏乙素对激活的小胶质细胞中PI3K表达和磷酸化水平的影响
2024年
目的:探究灯盏乙素对激活的小胶质细胞磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化PI3K(p-PI3K)水平的影响。方法:用大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)法制备脑缺血模型,大鼠随机分成假手术组(Sham)、脑缺血组(MCAO)、脑缺血+灯盏乙素组(MCAO+S)。利用糖氧剥夺(OGD)法制备BV2小胶质细胞缺血缺氧损伤模型,随机分成对照组(Control)、OGD组、OGD+灯盏乙素组(OGD+S)。运用免疫荧光双标染色和Western Blot法检测不同组中小胶质细胞PI3K及PI3K磷酸化水平的变化。结果:体内和体外免疫荧光及Western Blot结果均显示,激活的小胶质细胞中PI3K磷酸化水平明显增加(P<0.05),灯盏乙素干预后PI3K磷酸化水平进一步升高(P<0.05);PI3K在各组间无明显变化(P>0.05)。结论:灯盏乙素可能通过上调激活的小胶质细胞中PI3K的磷酸化水平,对脑缺血发挥积极的治疗作用。
杨丽芳段兆达杨毓甲徐冬垚吴春云杨力
关键词:脑缺血灯盏乙素小胶质细胞磷脂酰肌醇3-激酶
电针膝三针对膝骨关节炎大鼠TLR4及NF-κBp65磷酸化水平变化的影响
2024年
目的:探讨电针膝三针对膝骨关节炎大鼠Toll样受体4(TLR4)及核因子κBp65(NF-κBp65)磷酸化水平变化的影响。方法:选取40只8月龄大鼠,10只为对照组,其余30只采用后肢跟腱切除法造模。造模后平均分为模型组、电针组和塞来昔布组,8周后取材。肉眼和光镜下观察各组大鼠膝软骨组织形态学变化,分别通过Moran评分、Mankin评分判定软骨病变程度;用Western blot法分别检测各组大鼠软骨TLR4、NF-κBp65磷酸化蛋白(p-NF-κBp65)以及白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量变化。结果:模型组Moran评分低于对照组,Mankin评分高于对照组;而电针组和塞来昔布组Moran评分高于模型组,Mankin评分低于模型组。模型组大鼠TLR4、p-NF-κBp65、IL-6、TNF-α表达水平高于对照组,而电针组和塞来昔布组TLR4、p-NF-κBp65、IL-6、TNF-α表达水平低于模型组。结论:电针膝三针可减少膝关节炎大鼠软骨破坏,延缓软骨退变,其作用机制可能是通过下调TLR4/NF-κBp65通路关键调节因子TLR4、p-NF-κBp65的表达,减少炎症因子IL-6、TNF-α的释放,从而延缓膝骨关节炎的发展进程。
王珍珍林菁曾振明郑侠海周斌
关键词:膝骨关节炎TOLL样受体4核因子ΚBP65
淫羊藿次苷Ⅱ调节海马tau蛋白磷酸化水平改善慢性脑低灌注大鼠的学习记忆功能障碍
2024年
目的:研究淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)抗慢性脑低灌注(CCH)诱导的大鼠学习记忆功能减退的作用及其可能的作用机制。方法:Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,HE染色观察海马神经元的形态,Nissl染色观察海马神经元的存活数量,Western blot检测海马tau蛋白在丝氨酸199位点磷酸化(p-Ser 199-tau)、丝氨酸396位点磷酸化(p-Ser 396-tau)、丝氨酸404位点磷酸化(p-Ser 404-tau)及苏氨酸231位点磷酸化(p-Thr 231-tau)的水平。结果:ICSⅡ(16 mg/kg)能改善CCH大鼠的学习记忆障碍,减轻海马CA1区神经元结构损伤,增加海马CA1区存活神经元数量,降低海马p-Ser 199-tau、p-Ser 396-tau、p-Ser 404-tau、p-Thr 231-tau的水平。结论:ICSⅡ具有改善CCH所致大鼠学习记忆功能减退及海马神经元损伤的作用,其机制可能与下调tau蛋白异常磷酸化水平有关。
尹彩霞崔婷张珏
关键词:TAU蛋白慢性脑低灌注学习记忆海马神经元
枸杞多糖对阿尔茨海默病合并2型糖尿病小鼠学习记忆能力及脑内Tau蛋白磷酸化水平的影响
2023年
目的探讨枸杞多糖(LBP)对阿尔茨海默病(AD)合并2型糖尿病(T2DM)小鼠学习记忆能力及脑内Tau蛋白磷酸化水平的影响。方法5月龄C57BL/6J小鼠16只随机分为对照组、T2DM组,同月龄APP/PS1小鼠32只随机分为AD组、AD+T2DM组、LBP组(100 mg·kg^(-1))、多奈哌齐组(0.75 mg·kg^(-1)),每组各8只。T2DM组、AD+T2DM组、LBP组、多奈哌齐组小鼠高糖高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素建立T2DM模型。治疗组以相应剂量药物干预,其余组给予等体积生理盐水。连续给药3个月后,Morris水迷宫实验评价各组小鼠学习记忆能力,HE染色观察各组小鼠脑组织细胞形态变化,Western Blot检测各组小鼠脑内不同位点磷酸化Tau蛋白及GSK3β蛋白的表达水平。结果LBP可缩短AD+T2DM模型小鼠逃避潜伏期、第一次穿越平台时间(P<0.05,P<0.05),增加穿越平台次数及目标象限停留时间(P<0.01,P<0.01),改善大脑皮层神经元形态损伤,降低皮层及海马Tau蛋白Ser404、Ser396及Ser199位点磷酸化水平(P<0.05,P<0.05,P<0.05;P>0.05,P<0.01,P<0.01)和GSK-3β及Tyr216位点磷酸化水平(P>0.05,P<0.01;P<0.01,P<0.01),提高GSK-3β蛋白Ser9位点磷酸化水平(P<0.01,P<0.05)。结论枸杞多糖可改善AD+T2DM模型小鼠的学习记忆能力,降低脑内Tau蛋白的磷酸化水平
叶红霞贺颖西齐妍强杨光屈祖卫胡艳丽
关键词:枸杞多糖阿尔茨海默病TAU蛋白磷酸化
缺血缺氧模型小鼠少突胶质前体细胞GluR2磷酸化水平的变化
2023年
目的:研究缺血缺氧性脑损伤(HIBI)模型小鼠少突胶质前体细胞(OPCs)中磷酸化谷氨酸受体2[p-GluR2(S880)]表达变化。方法:利用右侧颈总动脉结扎并缺氧90 min方法建立C57BL/6新生小鼠HIBI模型,采用高架十字迷宫和旷场实验评估小鼠的焦虑样行为,通过免疫荧光方法检测HIBI模型小鼠脑组织中p-GluR2(S880)、少突胶质细胞标记物4(O4)和髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达变化,用Western Blot检测p-GluR2(S880)和MBP的表达水平。结果:与假手术组相比,HIBI术后90 d小鼠有显著的焦虑样行为(P<0.05);MBP蛋白表达在HIBI术后14及28 d组明显减少;p-GluR2(S880)蛋白表达在HIBI术后各个时间点表达上调(P<0.05),HIBI组小鼠脑组织中O4与p-GluR2(S880)共标的阳性细胞数目显著升高(P<0.05)。结论:OPCs中p-GluR2(S880)表达上调可能导致HIBI模型小鼠成髓鞘障碍。
甄飞姚瑞芹邱振
关键词:谷氨酸受体2缺血缺氧脑白质损伤少突胶质前体细胞
腺苷预处理通过增加GSK-3β磷酸化水平减轻大鼠脑缺血再灌注损伤
2023年
目的观察腺苷预处理对脑缺血-再灌注(IR)损伤后大鼠海马组织内神经元核抗原(NeuN)、微管相关蛋白2(MAP2)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、磷酸化糖原合酶激酶3β(p-GSK-3β)和糖原合酶激酶(GSK-3β)表达的影响,探讨腺苷对大鼠IR的保护机制。方法将27只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)和腺苷预处理(AP组),每组9只,IR组和AP组建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。采用5分制神经行为学评分标准对大鼠进行评分;以TTC染色法观察各组大鼠脑梗死情况,并计算脑梗死体积比例,免疫荧光法检测各组大鼠脑组织中p-GSK-3β的表达,Western blot法检测各组大鼠脑组织中NeuN、MAP2、NSE、p-GSK-3β和GSK-3β的表达。结果与Sham组比较,IR组大鼠神经功能评分和脑梗死体积比例明显增高(P<0.01),IR组p-GSK-3β、NeuN、MAP2、NSE的表达水平及p-GSK-3β/GSK-3β比值明显降低(P<0.05);与IR组比较,AP组大鼠神经功能缺损评分和脑梗死体积比例降低(P<0.05),p-GSK-3β、NeuN、MAP2、NSE的表达水平及p-GSK-3β/GSK-3β的比值升高(P<0.05)。结论腺苷预处理可能通过提高GSK-3β磷酸化水平,保护IR损伤中的神经元。
周雅慧李泽栗延伟谭军
关键词:腺苷预处理脑缺血再灌注糖原合酶激酶3Β
CREB3通过下调FAK磷酸化水平抑制胶质瘤细胞增殖及侵袭转移的体外实验研究
2023年
目的研究环磷酸腺苷反应原件结合蛋白3(CREB3)基因与胶质瘤患者的生存预后相关性,以及其在胶质瘤细胞增殖及侵袭转移等恶性生物学行为中的功能作用及发生机制,为寻找有效的胶质瘤分子治疗靶点提供理论依据。方法CREB3的mRNA表达水平及其存活率来自中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库。免疫组化(IHC)验证在不同级别的人脑胶质瘤组织中CREB3和磷酸化部黏着斑激酶397位点(p-FAK397)蛋白的表达情况。慢病毒构建U87、U251的CREB3的敲低模型。利用蛋白质印记技术(WB)验证p-FAK和其通路上相关蛋白以及相关凋亡蛋白的表达情况。使用细胞增殖实验(CCK-8)计算细胞在450 nm出的光密度(OD)及平板克隆实验验证敲低慢病毒敲低CREB3后细胞的增殖能力,利用细胞划痕,Transwell实验验证敲低细胞系的迁移和侵袭的能力。结果根据CGGA数据库,发现CREB3在高级别胶质瘤中表达上调,提示预后不良(P<0.05)。IHC表明随着胶质瘤级别的增高CREB3表达随之增加,而p-FAK(397)则在Ⅳ级胶质瘤中明显表达。构建慢病毒敲低CREB3的U87、U251细胞系通过WB表明可以使p-FAK(397)的表达下降,促凋亡蛋白(BAX)表达增加,抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达减少(P<0.05),并且可以在体外抑制胶质瘤的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。结论CREB3在高级别胶质瘤组织中表达增高,且与患者生存预后密切相关。敲低CREB3下调胶质瘤细胞中FAK的磷酸化水平,进而介导胶质瘤细胞的增殖及侵袭迁移能力变弱。
张懿炜胡亚欣出良钊严昭曾茜蒲茜刘健
关键词:胶质瘤U251细胞迁徙细胞增殖
人参皂苷Rg1对脓毒症所致心肌损伤大鼠NF-κB磷酸化水平及炎症相关通路的影响被引量:4
2023年
目的:探究人参皂苷Rg1对脓毒症所致心肌损伤大鼠核因子-κB(NF-κB)磷酸化水平及炎症相关通路的影响。方法:盲肠结扎穿孔法(CLP)构建大鼠脓毒症心肌损伤模型,60只大鼠随机分为假手术(sham)组、CLP组、人参皂苷Rg1低剂量(CLP+Rg1_(L))组、人参皂苷Rg1中剂量(CLP+Rg1_(M))组、人参皂苷Rg1高剂量(CLP+Rg1_(H))组、瑞沙托维(CLP+TAK-242)组,每组10只。LPS构建体外脓毒症心肌细胞模型,H9C2细胞分为对照(control)组、LPS组、LPS+Rg1_(L)组、LPS+Rg1_(M)组、LPS+Rg1_(H)组、LPS+TAK-242组。右颈总动脉插管法检测各组大鼠平均动脉压(MABP)、心率×左心室发展压(LVDP×HR)、左心室压力最大上升/下降速率(±dp/dt_(max))水平;HE染色观察心肌组织病理学改变;Annexin V-FITC/PI双染法检测心肌组织和H9C2细胞凋亡;ELISA检测大鼠血清和H9C2细胞肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、天冬氨酸转氨酶(AST)、肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-1β含量;CCK-8及EdU染色检测H9C2细胞增殖能力;RT-qPCR检测心肌组织Toll样受体4(TLR4)、NF-κB p65、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)mRNA表达;Western blot检测心肌组织TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、p38MAPK、p-p38MAPK、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达。结果:人参皂苷Rg1能够提高MABP、LVDP×HR、±dp/dt_(max)水平,降低CK、LDH、AST活力,降低cTnⅠ、TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4、NF-κB p65、p38MAPK mRNA与TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38MAPK/p38MAPK、NLRP3蛋白水平(P<0.05),促进心肌细胞增殖,抑制细胞凋亡与炎症水平,改善心肌损伤。结论:人参皂苷Rg1能够抑制心肌组织细胞凋亡及炎症水平,提高心功能,从而减轻脓毒症所致心肌损伤,其机制可能与TLR4/NF-κB、p38MAPK信号通路有关。
荆忻胡文沈佳罗彩琴杨波荆忱
关键词:人参皂苷RG1脓毒症心肌损伤P38丝裂原活化蛋白激酶炎症

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李俊发
作品数:256被引量:504H指数:11
供职机构:首都医科大学基础医学院
研究主题:低氧预适应 小鼠 磷酸化水平 蛋白激酶C 脑组织内
韩松
作品数:99被引量:183H指数:7
供职机构:首都医科大学
研究主题:小鼠 低氧预适应 脑组织内 磷酸化水平 低氧
张德权
作品数:486被引量:1,908H指数:23
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研究主题:羊肉 原料肉 肉制品 烤制 胴体
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作品数:26被引量:46H指数:5
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研究主题:低氧预适应 磷酸化水平 小鼠 蛋白表达量 蛋白激酶C
祖鹏宇
作品数:25被引量:37H指数:3
供职机构:首都医科大学
研究主题:脑组织内 小鼠 低氧 膜转位 磷酸化水平