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沉默Versican V0/V1对小鼠牙乳头 细胞生物学行为的影响 2024年 目的探究多功能蛋白聚糖(Versican)V0/V1对小鼠牙乳头 细胞(mouse dental papilla cells,mDPCs)生物学行为的影响。方法体外培养E16.5d胎鼠mDPCs,使用小干扰RNA(siRNA)沉默mDPCs的Versican V0/V1基因,通过qRT-PCR和免疫荧光染色验证沉默效率;通过EdU实验检测细胞增殖率,划痕实验及Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力;碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色分别评估mDPCs的矿化情况,并利用qRT-PCR检测其成牙 和矿化相关基因表达水平。结果siRNA转染后,与si-NC组相比,si-Versican V0/V1组mDPCs的增殖能力及迁移能力减弱(P<0.01),si-Versican V0/V1组碱性磷酸酶染色更深且矿化结节数量增加,si-Versican V0/V1组成牙 和矿化相关的基因表达量增加(P<0.05)。结论沉默Versican V0/V1抑制mDPCs增殖和迁移,但促进mDPCs成牙 分化和矿化。 吴佳艳 黄海燕 宋宸宇 蒋备战根尖牙乳头 干细胞成骨分化的研究进展 2024年 根尖牙乳头 干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)具有很强的多系分化潜能,其中成骨分化可以应用于骨组织再生,为口腔颌骨缺损治疗提供新思路。成骨分化是个复杂的网络调控过程,诸如各种细胞因子、表观遗传物质、各种信号分子和信号通路等内源性物质均可产生不同程度的影响。这些因素相互作用可以促进SCAP的增殖、迁移和成骨分化,但其在SCAP成骨分化的不同进程中的具体机制和内在联系各不相同。对近年来有关促进SCAP成骨分化的各种因素及其可能的调控机制研究文献进行综述,以期为其进一步的应用研究提供新信息。 钱石兵 史会萍 李艳秋 杨镕羽 段开文关键词:成骨分化 细胞因子 表观遗传 信号通路 内源性透明质酸对小鼠牙乳头 细胞增殖的影响 2024年 目的:探究内源性透明质酸(hyaluronan, HA)对小鼠牙乳头 细胞(mouse dental papilla cells, mDPCs)增殖的影响。方法:对出生后2.5 d的小鼠腹腔注射5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2′-deoxyuridine, EdU)标记快速增殖细胞;体外分离培养mDPCs,使用不同浓度透明质酸酶(hyaluronidase, HAase)降解HA,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法及EdU法检测细胞增殖;使用流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡;转染siHyal2抑制HA降解,EdU法检测细胞增殖。结果:HA主要表达在小鼠切牙 根尖慢增殖间充质细胞周围,而在转运扩增细胞(transit-amplifying cells, TACs)表达下降;CCK-8结果显示,相比对照组,800μg/mL HAase明显促进细胞增殖(P<0.0001);EdU检测及流式细胞术结果显示,HAase处理48 h后,细胞DNA合成增加,S期细胞比率明显增加(P<0.01),并抑制早期细胞凋亡(P<0.05);与之相反,当HA积聚在mDPCs细胞周,细胞增殖受到抑制(P<0.01)。结论:内源性HA与mDPCs增殖密切相关,HA分解可促进细胞增殖;而局部HA的积聚则抑制细胞增殖。 黄海燕 颜燕宏 刘塬 吴佳艳 宋宸宇 蒋备战关键词:细胞外基质 透明质酸 细胞增殖 新型生物陶瓷材料对人根尖牙乳头 干细胞增殖及成骨分化的影响 2024年 目的评估新型生物陶瓷类材料c-Root SP对人根尖牙乳头 干细胞(hSCAPs)的细胞增殖及骨诱导能力。方法制备不同浓度c-Root SP浸提液,采用CCK-8法检测其对hSCAPs的细胞增殖情况,使用碱性磷酸酶(ALP)活性测定法测定ALP酶水平和茜素红染色法观察钙化结节形成情况,数据采用单因素方差分析,与iRootSP对比,评价c-Root SP促进细胞增殖及骨诱导能力。结果c-Root SP对hSCAPs的细胞增殖具有浓度依赖性,1/10浓度浸提液增殖水平最好,c-Root SP1/5、1/10、1/1000浓度浸提液对hSCAPs的细胞增殖的影响显著高于同浓度iRoot SP浸提液(P<0.05)。成骨方面,矿化诱导7天,iRoot SP ALP活性显著高于c-Root SP(P<0.05),矿化诱导14天c-Root SP矿化结节显著多于iRoot SP。结论c-Root SP具有对hSCAPs的良好细胞增殖及骨诱导能力,与iRoot SP相似。 张昊 张昊 张琛关键词:细胞增殖 骨诱导 WDR63促进人根尖牙乳头 干细胞成神经分化功能 2024年 目的:研究WD重复结构域63(WDR63)对人根尖牙乳头 干细胞(SCAPs)体外成神经分化能力的作用。方法:通过实时荧光定量PCR检测未转染慢病毒SCAPs中WDR63基因在成神经分化诱导3、6、9 d的表达变化,利用慢病毒转染分别获得WDR63稳定过表达和敲低的SCAPs,通过类神经球形成实验对各组SCAPs进行神经分化诱导,对类神经球的直径进行定量分析,免疫荧光染色实验检测SCAPs中巢蛋白(Nestin)和βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)的表达,实时荧光定量PCR实验检测神经分化相关指标βⅢ-tubulin、神经源性分化蛋白(NeuroD)、神经细胞黏附分子(NCAM)和Nestin基因的表达。结果:未转染慢病毒SCAPs中WDR63的表达量在成神经分化后的3、6、9 d逐渐增加(P<0.05);过表达WDR63后,WDR63基因(P<0.001)和蛋白表达增加,神经球直径增加(P<0.01),Nestin和βⅢ-tubulin神经球样细胞荧光强度增加(P<0.01),βⅢ-tubulin、NeuroD、NCAM和Nestin基因表达升高(P<0.05);敲低WDR63后,WDR63基因(P<0.01)和蛋白的表达降低,神经球直径降低(P<0.05),Nestin和βⅢ-tubulin神经球样细胞荧光强度减少(P<0.05),βⅢ-tubulin、NeuroD、NCAM和Nestin基因表达降低(P<0.05)。结论:WDR63可促进SCAPs的成神经分化功能。 周家玮 范志朋IL-34介导的NF-кB信号通路对根尖牙乳头 干细胞成牙 成骨定向分化的调节作用 2024年 目的:探讨白细胞介素-34(IL-34)介导的核因子кB(NF-кB)对根尖牙乳头 干细胞(SCAPs)成牙 /成骨定向分化调节作用。方法:使用酶消化法从小鼠根尖牙乳头 组织传代培养SCAPs;流式细胞术鉴定SCAPs中CD44、CD90、CD45及集落刺激因子1受体(CSF-1R)的表达;实验分为4组:空白对照组、IL-34组(100 ng/mL IL-34)、CSF-1R组(100 ng/mL IL-34+25 ng/mL anti-CSF-1R)、NF-кB组(100 ng/mL IL-34+1umol/L BMS-345541)。通过蛋白质印迹法(Western blot)分析各组30、60、120 min时SCAPs胞浆中NF-кB关键蛋白p-IкBα、IкBα、p-P65及P65蛋白的表达情况;矿化诱导4组SCAPs 3、7、14 d时,茜素红染色和半定量分析比较各组细胞的矿化结节形成能力;通过RT-qPCR检测各组SCAPs中成骨相关基因Runt相关转录因子-2(RUNX2)、牙 本质涎磷蛋白(DSPP)、骨钙素(OCN)mRNA水平。结果:流式细胞术显示,SCAPs中CD44(90.4%)、CD90(93.5%)阳性表达,造血干细胞CD45(3.1%)阴性表达,SCAPs表达CSF-1R(23.2%)阳性。与对照组比较,IL-34组SCAPs胞浆蛋白内p-IкBα、p-P65表达水平上调,矿化诱导3、7、14 d矿化结节形成量增多,细胞中RUNX2、DSPP、OCN mRNA相对表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与IL-34组比较,CSF-1R组和NF-кB组SCAPs胞浆蛋白内p-IкBα、p-P65表达水平下调(P<0.05),矿化诱导3、7、14 d矿化结节形成量减少,细胞中RUNX2、DSPP、OCN mRNA相对表达量降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-34可通过IL-34/CSF-1R调节SCAPs中NF-кB信号通路,并通过IL-34/CSF-1R/NF-кB信号调节SCAPs的成牙 /成骨定向分化能力。 朱永娜 武峻捷 刘茜 张伟健 石昕关键词:定向分化 根尖牙乳头 干细胞来源凋亡囊泡对巨噬细胞糖酵解相关酶的表达及炎症表型影响的初探研究 2024年 目的:探究根尖牙乳头 干细胞(SCAP)来源的凋亡囊泡(apoVs)是否通过影响糖酵解相关酶调控巨噬细胞(BMDMs)炎症表型,进而对炎症反应产生调节作用。方法:体外培养鉴定人源SCAP,经星形孢菌素诱导凋亡后提取apoVs,利用扫描电镜、流式细胞术等对其进行表征鉴定。分别空白处理、脂多糖(LPS)处理、LPS同apoVs共处理大鼠骨髓来源的BMDMs,利用流式细胞术检测促炎表型BMDMs表面标志分子CD80、CD86的表达,利用Western blot检测BMDMs糖酵解相关酶的表达。结果:根尖牙乳头 干细胞来源的apoVs能被BMDMs摄取,促炎表型标志分子CD80、CD86的表达下调,糖酵解相关酶葡萄糖转运蛋白(GLUT)1、GLUT3的表达显著下调(P<0.05)。结论:SCAP来源apoVs能降低促炎型BMDMs的分布,并对其糖酵解相关酶的表达产生影响。 曾涵柔 李长芳 王可境 张婧 骞爱荣 胡丽芳 王玮关键词:巨噬细胞 糖酵解 一种根尖牙乳头 干细胞与其凋亡囊泡及制备方法和应用 本发明公开了一种根尖牙乳头 干细胞及其凋亡囊泡的制备方法,包括:体外分离培养根尖牙乳头 干细胞;采用星形孢菌素诱导分离培养的根尖牙乳头 干细胞凋亡;三、收集细胞和培养液上清,通过离心法获得细胞凋亡囊泡。此外,本发明还公开了该根... 胡丽芳 王玮 骞爱荣 曾涵柔沉默PGC⁃1α表达对人根尖牙乳头 干细胞定向分化的影响 2023年 目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC⁃1α)在人根尖牙乳头 干细胞(hSCAPs)定向分化中的作用。方法:hSCAPs矿化诱导0、3、7 d,实时荧光定量PCR检测PGC⁃1α的基因表达水平。转染小干扰RNA(siRNA)构建稳定低表达PGC⁃1α的hSCAPs,通过实时荧光定量PCR和Western blot检测PGC⁃1α的表达水平,采用碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色分别检测ALP活性和矿化水平的变化,Western blot和实时荧光定量PCR检测成牙 /骨向分化相关蛋白和基因的变化。结果:PGC⁃1α的基因表达水平在hSCAPs定向分化过程中逐渐上调。与对照组相比,低表达PGC⁃1α的hSCAPs其ALP表达量下降,矿化结节减少,牙 本质涎磷蛋白(DSPP)、ALP、Runt相关转录因子2(RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)等成牙 /骨向分化相关指标表达水平下调(P<0.05)。结论:沉默PGC⁃1α表达可抑制hSCAPs定向分化。 肖雅 于瑞阳 陈路遥 顾婷杰 方玉心 李泽汉 于金华关键词:RNA干扰 雌激素缺乏对大鼠根尖牙乳头 干细胞增殖及牙 向/骨向分化能力的影响 2023年 目的:探讨雌激素缺乏对大鼠根尖牙乳头 干细胞(SCAPs)增殖及牙 向/骨向分化能力的影响。方法:选取20只8周龄雌性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组和卵巢去势(OVX)组,每组各10只。全麻下OVX组摘除双侧卵巢,Sham组行相同切口保留双侧卵巢,术前、术后1个月分别检测两组大鼠血清雌二醇水平。1个月后每组各处死5只大鼠,分离切牙 根尖牙乳头 组织,酶消化法分离培养两组SCAPs,采用MTT、碱性磷酸酶(ALP)活性检测、实时荧光定量PCR、Western blot检测雌激素缺乏对大鼠SCAPs增殖及成牙 /成骨向分化能力的影响。将两组SCAPs细胞以明胶海绵为载体分别植入对应组别大鼠肾被膜下,8周后取出植入组织,使用数字化X线牙 片机对取出团块曝光成像及HE染色观察其矿化能力。结果:OVX组大鼠去势1个月后血清雌二醇水平显著低于术前(P<0.001),Sham组大鼠血清雌二醇水平术前、术后差异无统计学意义(P>0.05)。MTT结果显示,OVX组SCAPs增殖能力显著下降(P<0.001)。ALP活性检测结果显示,OVX组SCAPs的ALP活性低于Sham组(P<0.001)。实时荧光定量PCR和Western blot结果均表明OVX组SCAPs的牙 本质涎磷蛋白(DSPP)、成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)、骨钙素(OCN)等成牙 /成骨相关基因和蛋白表达低于Sham组(P<0.01)。体内移植结果显示,Sham组形成密度较高的较规则牙 髓-牙 本质复合体,而OVX组形成不规则结构。结论:雌激素缺乏减弱大鼠SCAPs的增殖及牙 向/骨向分化能力。 李瑶 李瑶 曹灵 周俊波关键词:雌激素 增殖
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