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一种枯草芽孢杆菌全长cDNA文库构建方法及其定向筛选应用: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌全长cDNA文库构建方法及其定向筛选应用，属于基因工程技术领域。枯草芽孢杆菌B.subtilis是工业中常用的外源蛋白生产菌株，通过构建cDNA文库是筛选枯草芽孢杆菌功能基因的有效方法，本发明...; 吴敬张康朱昫飏

一种枯草芽孢杆菌全长cDNA文库构建方法及其定向筛选应用: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌全长cDNA文库构建方法及其定向筛选应用，属于基因工程技术领域。枯草芽孢杆菌B.subtilis是工业中常用的外源蛋白生产菌株，通过构建cDNA文库是筛选枯草芽孢杆菌功能基因的有效方法，本发明...; 吴敬张康朱昫飏; 文献传递

基于全长cDNA文库筛选促进真核基因异源表达相关功能元件: 随着基因工程技术的快速发展，改造底盘细胞来异源表达天然产物生物合成基因簇成为发现新型天然产物的重要策略之一。天然产物具有各种生物活性，广泛应用于新药研发、分子设计等方面。相较于原核生物合成基因簇，真核基因的表达需要独立的...; 徐康; 关键词：青霉异源表达 CDNA文库

牛樟芝菌丝体全长cDNA文库构建及EST序列分析被引量：1: 2020年; 目的为了更好地挖掘牛樟芝Antrodiacinnamomea菌丝体三萜合成和代谢相关基因、筛选互作蛋白和牛樟芝指纹图谱分析,构建了牛樟芝菌丝体cDNA文库并分析其表达序列标签(EST)序列。方法以牛樟芝菌丝体为材料,采用Gateway法构建其cDNA文库,对部分EST序列进行生物信息学分析、功能注释和EST-SSR分析。结果成功构建了牛樟芝菌丝体cDNA文库,经鉴定文库重组率高达95%,文库滴度为6.1×106 cfu/mL,总克隆数为1.2×107 cfu,插入片段大小为300~2000 bp,平均长度达1000 bp。随机挑选单克隆进行测序获得65个有效EST序列,其中1个重叠群,64个单一序列,比对结果显示有45条序列有明确功能注释,18条为未知功能基因,GO功能注释结果表明序列涉及细胞组成、转运、催化活性、调控等功能。所有EST序列共含有271个SSR,牛樟芝核苷酸重复类型丰富,其中二核苷酸和三核苷酸重复基元占总重复基元的94.23%。结论初步明确牛樟芝菌丝体cDNA文库及其EST序列相关生物信息,为牛樟芝菌丝体基因组学研究奠定理论基础。; 李晶陈莉刘朋虎夏舒宁刘艳玲林占熺; 关键词：CDNA文库表达序列标签

花生胚均一化全长cDNA文库的构建和分析: 2020年; 胚发育直接影响花生的产量与品质,钙对花生生长发育极其重要,土壤中钙不足可导致花生不饱满或空壳。为了获得花生胚发育的关键基因,从而进一步了解钙调控花生胚发育的分子机制,本研究采用低钙与高钙条件下花生果针入土后15 d、20 d和30 d的胚为材料,用SMART (Switching mechanism at 5’end of the RNA transcript)与均一化技术构建了低钙与高钙条件下混合的花生胚全长cDNA文库。鉴定结果表明,文库库容量达到1.5×106cfu/mL,插入片段主要分布在500~2 000 bp之间,重组率为98%,冗余度为0,文库质量较好,为后续筛选调控花生胚发育的关键基因提供了基础。; 陈坤杨强赵闪闪王珊珊付辉文刘梦涵孙涛陈华; 关键词：钙 SMART

日本结缕草衰老叶片全长cDNA文库构建及酵母单杂交筛选验证被引量：6: 2019年; 脱镁叶绿素脱镁叶绿酸水解酶(Pheophytin pheophorbide hydrolase,PPH)是叶绿素降解过程中的一个关键酶,目前有关日本结缕草(Zoysia japonica)PPH基因的上游调控机制仍不是十分清楚,筛选日本结缕草ZjPPH1基因上游转录因子可以为延长绿期延缓衰老提供理论依据。本研究利用Clontech的SMRT cDNA合成技术构建一个日本结缕草衰老叶片的高质量全长cDNA文库,其滴度为2.0×106 cfu·mL-1,插入片段平均长度大于1 kb,cDNA片段插入重组率为100%。该文库的完整性较高,可涵盖绝大多数基因信息,为酵母单杂交筛选奠定了基础。利用酵母单杂交技术,筛选到可与ZjPPH1基因启动子片段结合的候选菌落42个,并对20个候选基因进行测序和生物信息学分析,初步筛选到6个参与细胞生长和衰老过程的重要候选基因,为进一步探索ZjPPH1基因在日本结缕草衰老和叶绿素降解中的上游调控机制提供了理论支撑。; 滕珂檀鹏辉范希峰岳跃森姜红岩武菊英; 关键词：日本结缕草全长CDNA文库酵母单杂交

一种高效快速的均一化全长cDNA文库构建方法: 本发明公开了一种高效快速的均一化全长cDNA文库构建方法，包括如下步骤：将mDNA在PCR引物以及寡核苷酸引物的引导下，通过逆转录酶逆转录，能够合成第一链cDNA，将纯化时的第一链cDNA需要结束时，将第一链cDNA放到...; 李泽卿; 文献传递

Gateway技术构建菊芋块茎全长cDNA文库及EST测序分析被引量：3: 2018年; 为丰富菊芋功能基因组学研究基础平台,以成熟期菊芋块茎为材料,将菊芋全长cDNA与Gateway供体载体pDONR222重组,构建了菊芋非剪切型全长cDNA文库。文库质量分析表明:未经扩增的原始文库库容量为5.76×10~6 CFU,插入片段大小主要为1～3000 bp,重组率为100%(24/24),达到了高质量文库的标准。利用该文库进行表达序列标签(expressed sequence tag, EST)测序,得到2639条高质量的EST序列,拼接后获得1895条非重复的唯一表达序列(unigene)。与NCBI的NR数据库同源比对分析表明,共有1533条unigene(80.9%)与已知基因有显著的同源性。GO分类结果显示:菊芋块茎表达基因在分子功能类群中,结合和催化活性所占比例最高。此cDNA文库将可用于菊芋功能基因组研究、新基因筛选、高通量EST测序以及菊芋cDNA芯片的制备等。; 杨少丽秦松; 关键词：GATEWAY技术基因注释

绒毛状烟草和林烟草全长cDNA文库构建及EST序列分析: 2018年; 表达序列标签(EST)广泛应用于基因功能研究和分子标记开发。以普通烟草两个二倍体祖先种绒毛状烟草(Nicotiana tomentosiformis, TT)和林烟草(Nicotiana sylvestris, SS)多个组织为试验材料,使用CloneMiner cDNA文库构建方法构建了均一化全长c DNA文库,测序并进行序列拼接、功能注释、进化分析和标记开发。绒毛状烟草和林烟草均一化全长c DNA文库容量分别为0.72×106和1.12×106pfu/mL,重组率分别约为94%和93%,插入片段平均长度为1.4kb。测序获得20 953条EST序列,拼接为10 504个unigenes。与普通烟草EST序列混合拼接,产生34 450条contigs,123 511条singletons,烟草异源四倍体中T和S基因与绒毛状烟草、林烟草之间的相似性远高于两个二倍体祖先种之间。预测获得104 915个编码序列,其中73 670个序列包含功能结构域,81%unigenes在番茄中具有同源基因。鉴定了11 869个微卫星位点(SSR)和25 209个单核苷酸多态性位点(SNP)。这些数据信息对于烟草基因功能研究和分子育种具有重要价值。; 孙榕陈明丽解敏敏孙玉合龚达平; 关键词：烟草 CDNA文库 SSR

自身免疫性肝炎患者外周血淋巴细胞全长cDNA文库的构建: 2018年; 目的成功构建自身免疫性肝炎患者外周血淋巴细胞cDNA文库,同时进行文库的鉴定。方法分离自身免疫性肝炎患者外周血淋巴细胞并提取总RNA,利用SMART技术构建全长cDNA文库并进行文库质量的鉴定,最后扩增文库并随机挑取10个噬菌斑鉴定插入片段大小。结果构建的cDNA文库滴度为3.4×108 pfu/mL,重组率>97%,文库经过扩增后滴度达6.6×10^(11)pfu/mL,插入片段长度在0.5～2.0kb之间,平均长度为1.25kb。结论本文构建的自身免疫性肝炎患者外周血淋巴细胞cDNA文库符合建库要求,为进一步筛选、克隆其发病相关基因、探索发病机制奠定基础。; 度尧谢德胜陈云天; 关键词：自身免疫性肝炎 CDNA文库

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