搜索到208篇“ 体外分子进化“的相关文章
基于体外分子进化技术提高弯曲芽孢杆菌CCTCC 2015368 β-淀粉酶的热稳定性被引量:2
2018年
运用体外分子进化技术易错PCR方法,高通量筛选热稳定性提高的弯曲芽孢杆菌Bacillus flexus CCTCC2015368β-淀粉酶突变体。利用LB琼脂淀粉板显色、96-孔板DNS法测酶活和酶标仪检测等,最终筛选到了一株热稳定性显著提高的突变体D476N。野生型和突变体D476N分别纯化后,酶学性质测定表明:突变体D476N的最适pH为6.5,与野生型相比降低了0.5。突变体D476N和野生型的最适温度均为55℃,突变体D476N在55℃下的半衰期为35 min,比野生型提高了95%。突变体D476N的T_(50)值比野生型提高4℃。突变体D476N的K_m值为97.98μmol/L,是野生型(85.86μmol/L)1.14倍;突变体稳定性提高的同时,催化活力相对于野生型有略微下降。通过SWISS-MODEL同源模拟野生型和突变体D476N的三维结构,并通过PyMol软件分析,发现突变后的氨基酸残基Asn476位于蛋白质表面的loop环上,通过MOE软件计算,D476N的分子自由能(ΔG)为106.01kcal/mol,比野生酶降低10.3%,这一结果与蛋白质分子自由能和热稳定性呈负相关的理论相符。
陈磊陈晟吴敬吴丹
关键词:分子进化易错PCRΒ-淀粉酶热稳定性
体外分子进化提高甲基对硫磷水解酶的催化活力
有机磷酸酯(OPs)由于其极强的的毒性而被用作神经毒剂和杀虫剂,并且由于其对乙酰胆碱酯酶的抑制从而引起严重的环境和人类健康问题。甲基对硫磷水解酶(Methyl parathion hydrolase,MPH)可实现在大肠...
李英南
关键词:甲基对硫磷水解酶定向进化
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新型抗体结合分子AL插入突变体的体外分子进化研究
免疫球蛋白结合蛋白(Immunoglobulin(Ig)-binding proteins,IBPs)是细菌产生的能够与抗体结合的一类蛋白,在发病中发挥着重要的作用。其中最重要的三种代表分子为金黄色葡萄球菌蛋白A(Sta...
冯娇娇
关键词:病原体特异性抗体检测
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新型免疫球蛋白结合分子AL插入突变体的体外分子进化研究
免疫球蛋白结合蛋白(Immunoglobulin (Ig)-binding proteins, IBPs)是细菌产生的能够与抗体结合的一类蛋白,在发病中发挥着重要的作用。其中最重要的三种代表分子为金黄色葡萄球菌蛋白A (...
冯娇娇
关键词:体外分子进化
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体外分子进化改善β-葡萄糖苷酶酶学特性
本文从多粘类芽孢杆菌BN1菌株中克隆出β-葡萄糖苷酶基因,以野生型基因为起点,通过定点突变按照设计的密码子优化策略提高野生型β-葡萄糖苷酶的异源表达量;再以优化后的高表达型基因为起点,通过定向进化和活性筛选策略提高野生型...
刘震
关键词:Β-葡萄糖苷酶密码子优化定点突变定向进化
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运用体外分子进化的方法提高麦芽四趟淀粉酶活性的研究
麦芽四糖淀粉酶(Glucan1,4-alpha-maltotetraohydrolase, EC3.2.1.60)属于外切型淀粉酶,可以顺序地从淀粉非还原性末端依次切割第四个α-1,4糖苷键,产物为麦芽四糖(G4),广泛...
韦云萍
关键词:麦芽四糖淀粉酶体外分子进化易错PCR
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蛋白质功能体外分子进化的方法
本发明提供自父本多核苷酸序列生成多核苷酸序列或序列集群的方法,该方法包括步骤(a)提供父本多核苷酸分子集群,该集群包括正链和负链,(b)处理父本多核苷酸分子集群以生成其多核苷酸片段集群,(c)在允许重叠片段对形成的条件下...
K·哈拉尔德松C·富雷布林K·巴尔汉
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蛋白质功能体外分子进化的方法
本发明提供自父本多核苷酸序列生成多核苷酸序列或序列集群的方法,该方法包括步骤(a)提供父本多核苷酸分子集群,该集群包括正链和负链,(b)处理父本多核苷酸分子集群以生成其多核苷酸片段集群,(c)在允许重叠片段对形成的条件下...
K·哈拉尔德松C·富雷布林K·巴尔汉
蛋白功能的体外分子进化方法
本发明提供用于从母多核苷酸序列产生多核苷酸序列或序列的群体的方法,该方法包括步骤(a)提供多核苷酸分子的第一群体和多核苷酸分子的第二群体,第一和第二群体共同组成了母多核苷酸序列的正链和负链,(b)用核酸酶消化多核苷酸分子...
K·哈拉尔德松M·卡尔松A-C·M·哈格尔C·菲雷布林F·卡尔松P·埃尔马克
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通过体外分子进化技术提高淀粉液化芽胞杆菌BS5582 β-1,3-1,4-葡聚糖酶热稳定性被引量:5
2010年
应用基于易错PCR随机突变的体外分子进化技术,来提高淀粉液化芽胞杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶的热稳定性。利用建立的基于96微孔板高通量筛选模型,经过两轮定向进化与高通量筛选,共筛选得到3株热稳定性明显提高的突变体2-JF-01、2-JF-02和2-JF-03。将野生型β-葡聚糖酶基因和热稳定性提高的突变基因的高效表达产物经镍亲和层析柱纯化后,酶学性质测定表明突变酶2-JF-01、2-JF-02和2-JF-03的T50值分别比野生酶(53℃)提高2.2℃、5.5℃和3.5℃。突变酶2-JF-01、2-JF-02和2-JF-03在60℃下的半衰期t1/2,60℃(min)分别比野生酶(18min)提高4min、13min和17min。突变酶2-JF-01、2-JF-02和2-JF-03的Vmax值为286μmol/(mg·min)、304μmol/(mg·min)和279μmol/(mg·min),分别比野生型下降8.3%、2.6%和10.6%。突变酶2-JF-01、2-JF-02和2-JF-03的Km值分别为6.76mg/mL、6.19μmg/mL和6.84mg/mL,与野生型(6.29mg/mL)基本相同。序列分析表明,3个突变体共发生7个氨基酸替代:2-JF-01(N36S,G213R)、2-JF-02(C86R,S115I,N150G)和2-JF-03(E156V,K105R)。同源建模表明,7个氨基酸替代中5个位于蛋白质表面或表面洞穴中,42.8%的替代氨基酸是精氨酸,也表明精氨酸在提高β-1,3-1,4-葡聚糖酶热稳定性中起重要的作用。
秦久福高威威李崎李永仙郑飞云刘春风顾国贤
关键词:Β-1,3-1,4-葡聚糖酶体外分子进化易错PCR热稳定性

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姚泉洪
作品数:335被引量:1,038H指数:15
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研究主题:芹菜 胡萝卜 基因克隆 转录因子 基因
彭日荷
作品数:293被引量:354H指数:11
供职机构:上海市农业科学院
研究主题:基因 终止子 毕赤酵母 蛋白质序列 多基因
章镇
作品数:454被引量:4,000H指数:33
供职机构:南京农业大学园艺学院
研究主题:果梅 苹果 葡萄 基因 克隆
冯娇娇
作品数:8被引量:17H指数:3
供职机构:第二军医大学政治部
研究主题:突变体 噬菌体文库 SPA AL 分子进化研究